| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第10-20页 |
| 1.1 蓖麻概述 | 第10-11页 |
| 1.1.1 蓖麻简介 | 第10页 |
| 1.1.2 蓖麻的综合利用价值 | 第10-11页 |
| 1.1.3 矮化蓖麻育种的重要性 | 第11页 |
| 1.2 GA20-氧化酶基因研究进展 | 第11-13页 |
| 1.2.1 GA20-氧化酶基因功能研究 | 第11-12页 |
| 1.2.2 GA20-氧化酶基因与植物生长发育的关系 | 第12-13页 |
| 1.3 RNA干扰技术及其在植物研究中的应用 | 第13-16页 |
| 1.3.1 RNA干扰技术 | 第13-14页 |
| 1.3.2 RNA干扰载体的构建 | 第14-15页 |
| 1.3.3 RNA干扰技术在植物中的应用 | 第15-16页 |
| 1.4 蓖麻离体再生体系 | 第16-18页 |
| 1.4.1 外植体类型选择 | 第16-17页 |
| 1.4.2 细胞分裂素与生长素对胚性细胞的诱导 | 第17页 |
| 1.4.3 LEC1基因表达与实际出芽效率 | 第17-18页 |
| 1.5 蓖麻遗传转化研究进展 | 第18-19页 |
| 1.6 本研究的目的、意义及主要内容 | 第19-20页 |
| 1.6.1 本研究的目的及意义 | 第19页 |
| 1.6.2 本研究的主要内容 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-24页 |
| 2.1.1 蓖麻材料 | 第20页 |
| 2.1.2 质粒和菌种 | 第20页 |
| 2.1.3 主要实验耗材与仪器设备 | 第20-21页 |
| 2.1.4 实验试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.5 溶液与培养基配制 | 第22-24页 |
| 2.2 蓖麻GA20-氧化酶基因克隆及表达分析 | 第24-31页 |
| 2.2.1 蓖麻总RNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.2 cDNA的合成 | 第25页 |
| 2.2.3 目的片段的PCR扩增 | 第25-26页 |
| 2.2.4 目的片段的纯化回收 | 第26-27页 |
| 2.2.5 目的片段与pUC-T载体的连接 | 第27页 |
| 2.2.6 大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第27-28页 |
| 2.2.7 重组质粒的提取与酶切验证 | 第28-29页 |
| 2.2.8 序列分析 | 第29页 |
| 2.2.9 半定量RT-PCR反应 | 第29-30页 |
| 2.2.10 RcGA20-ox基因的编码区分析 | 第30页 |
| 2.2.11 RcGA20-ox基因荧光定量表达分析 | 第30-31页 |
| 2.3 蓖麻GA20-氧化酶基因RNAi植物表达载体构建 | 第31-35页 |
| 2.3.1 In-Fusion技术构建植物表达载体 | 第31-34页 |
| 2.3.2 根癌农杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第34-35页 |
| 2.4 分子水平评价机制对蓖麻高效再生体系的优化 | 第35-37页 |
| 2.4.1 外植体的制备 | 第35页 |
| 2.4.2 不定芽诱导培养基筛选 | 第35-37页 |
| 2.4.3 不定芽伸长培养基筛选 | 第37页 |
| 2.4.4 生根培养及再生植株的移栽 | 第37页 |
| 2.5 植物表达载体pBI-GA20ox-RNAi对蓖麻胚尖的遗传转化 | 第37-40页 |
| 2.5.1 真空辅助农杆菌介导法转化蓖麻 | 第37-38页 |
| 2.5.2 抗性植株PCR检测 | 第38-39页 |
| 2.5.3 转化植株的RcGA20-ox基因表达分析 | 第39-40页 |
| 3 结果与讨论 | 第40-69页 |
| 3.1 蓖麻GA20-氧化酶基因克隆及表达分析 | 第40-50页 |
| 3.1.1 蓖麻总RNA提取结果 | 第40页 |
| 3.1.2 GA20-ox基因扩增结果 | 第40-41页 |
| 3.1.3 大肠杆菌转化结果 | 第41页 |
| 3.1.4 重组克隆载体的提取及酶切验证 | 第41-42页 |
| 3.1.5 测序比对结果 | 第42-43页 |
| 3.1.6 RcGA20-ox基因蛋白结构分析 | 第43-44页 |
| 3.1.7 半定量RT-PCR反应结果 | 第44-45页 |
| 3.1.8 RcGA20-ox基因的编码区比较 | 第45-48页 |
| 3.1.9 RcGA20-ox基因相对表达分析结果 | 第48-50页 |
| 3.2 蓖麻GA20-氧化酶基因RNAi植物表达载体构建 | 第50-56页 |
| 3.2.1 pHANNIBAL载体质粒提取及验证结果 | 第50-51页 |
| 3.2.2 插入片段PCR结果 | 第51-52页 |
| 3.2.3 pBl121线性化结果 | 第52-53页 |
| 3.2.4 pBI-GA20ox-RNAi表达载体质粒提取 | 第53-54页 |
| 3.2.5 pBI-GA20ox-RNAi表达载体质粒酶切验证 | 第54-55页 |
| 3.2.6 pBl-GA20ox-RNAi转化农杆菌后质粒提取 | 第55页 |
| 3.2.7 pBI-GA20ox-RNAi转化农杆菌后PCR验证 | 第55-56页 |
| 3.3 分子水平评价机制对蓖麻高效再生体系的优化 | 第56-64页 |
| 3.3.1 不同浓度配比6-BA+IAA与6-BA+IBA对不定芽诱导的影响 | 第56-58页 |
| 3.3.2 LEC1基因表达与实际出芽效率的关系 | 第58-62页 |
| 3.3.3 不同浓度GA_3对不定芽伸长的影响 | 第62页 |
| 3.3.4 生根与移栽 | 第62-64页 |
| 3.3.5 蓖麻再生体系全过程 | 第64页 |
| 3.4 转基因蓖麻的筛选及验证分析 | 第64-69页 |
| 3.4.1 蓖麻胚尖遗传转化全过程 | 第64-67页 |
| 3.4.2 抗性植株筛选结果 | 第67页 |
| 3.4.3 抗性植株PCR检测结果 | 第67页 |
| 3.4.4 转化植株RcGA20-ox基因表达分析结果 | 第67-69页 |
| 4 结论 | 第69-70页 |
| 5 展望 | 第70-71页 |
| 6 参考文献 | 第71-78页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第78-79页 |
| 8 致谢 | 第79页 |
