| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 前言 | 第10-24页 |
| 1.1 3-HP的研究现状 | 第10-18页 |
| 1.1.1 3-HP的理化性质及用途 | 第10页 |
| 1.1.2 3-HP的生产方法 | 第10-17页 |
| 1.1.3 不同宿主生产3-HP的案例 | 第17-18页 |
| 1.2 重组质粒的新型构建方法 | 第18-21页 |
| 1.2.1 重叠延伸PCR | 第18页 |
| 1.2.2 重组质粒的构建方法 | 第18-21页 |
| 1.3 无细胞合成 | 第21-22页 |
| 1.4 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第22-23页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第23-24页 |
| 第2章 酶的克隆与表达 | 第24-36页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 实验材料 | 第24-27页 |
| 2.2.1 菌种及质粒 | 第24-25页 |
| 2.2.2 试剂与仪器 | 第25页 |
| 2.2.3 培养基 | 第25-26页 |
| 2.2.4 主要溶液 | 第26-27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-29页 |
| 2.3.1 菌种的培养 | 第27页 |
| 2.3.2 基因操作 | 第27-29页 |
| 2.3.3 蛋白表达 | 第29页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第29-35页 |
| 2.4.1 目的基因的克隆 | 第29-33页 |
| 2.4.2 目的蛋白的表达 | 第33-35页 |
| 2.5 本章小结 | 第35-36页 |
| 第3章 利用酿酒酵母体内同源重组体系构建重组大肠杆菌 | 第36-48页 |
| 3.1 引言 | 第36页 |
| 3.2 实验材料 | 第36-37页 |
| 3.2.1 菌种及质粒 | 第36页 |
| 3.2.2 试剂与仪器 | 第36页 |
| 3.2.3 培养基 | 第36-37页 |
| 3.2.4 主要溶液 | 第37页 |
| 3.3 实验方法 | 第37-42页 |
| 3.3.1 菌种的培养 | 第37-38页 |
| 3.3.2 基因操作 | 第38-40页 |
| 3.3.3 重组大肠杆菌的摇瓶实验 | 第40页 |
| 3.3.4 实时荧光定量PCR | 第40-42页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第42-46页 |
| 3.4.1 目的片段的拼接 | 第42-43页 |
| 3.4.2 重组质粒的验证 | 第43-45页 |
| 3.4.3 摇瓶数据分析 | 第45-46页 |
| 3.5 本章小结 | 第46-48页 |
| 第4章 利用重组酶体外同源重组体系构建重组菌 | 第48-60页 |
| 4.1 引言 | 第48页 |
| 4.2 实验材料 | 第48-49页 |
| 4.2.1 菌种及质粒 | 第48页 |
| 4.2.2 试剂与仪器 | 第48-49页 |
| 4.2.3 培养基 | 第49页 |
| 4.3 实验方法 | 第49-52页 |
| 4.3.1 菌种的培养 | 第49页 |
| 4.3.2 基因操作 | 第49-50页 |
| 4.3.3 重组菌的摇瓶实验 | 第50页 |
| 4.3.4 实时荧光定量PCR | 第50-51页 |
| 4.3.5 分析方法 | 第51-52页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第52-59页 |
| 4.4.1 目的片段的拼接 | 第52-53页 |
| 4.4.2 重组质粒的验证 | 第53-55页 |
| 4.4.3 摇瓶数据分析 | 第55-59页 |
| 4.5 本章小结 | 第59-60页 |
| 第5章 无细胞合成体系 | 第60-71页 |
| 5.1 引言 | 第60页 |
| 5.2 实验材料 | 第60-61页 |
| 5.2.1 菌株 | 第60页 |
| 5.2.2 实验试剂与仪器 | 第60页 |
| 5.2.3 主要溶液 | 第60-61页 |
| 5.3 实验方法 | 第61-64页 |
| 5.3.1 菌株的培养 | 第61-62页 |
| 5.3.2 蛋白纯化 | 第62页 |
| 5.3.3 蛋白浓度的测定 | 第62页 |
| 5.3.4 纯化后蛋白的处理 | 第62-63页 |
| 5.3.5 无细胞合成反应 | 第63-64页 |
| 5.3.6 分析方法 | 第64页 |
| 5.4 实验结果与讨论 | 第64-70页 |
| 5.4.1 蛋白纯化 | 第64-68页 |
| 5.4.2 无细胞合成反应 | 第68-70页 |
| 5.5 本章小结 | 第70-71页 |
| 第6章 结论与展望 | 第71-73页 |
| 6.1 结论 | 第71页 |
| 6.2 展望 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-82页 |
| 致谢 | 第82页 |