| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 中英文缩写 | 第13-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-30页 |
| 1.1 铜绿假单胞菌及其致病性 | 第14页 |
| 1.2 抗生素 | 第14-18页 |
| 1.2.1 抗生素的介绍及作用机理 | 第14-16页 |
| 1.2.2 亚抑菌浓度抗生素的作用 | 第16-17页 |
| 1.2.3 壮观霉素介绍 | 第17-18页 |
| 1.3 假尿嘧啶合成酶及其功能 | 第18-24页 |
| 1.3.0 PA3114基因介绍 | 第18-19页 |
| 1.3.1 假尿嘧啶合成酶 | 第19-22页 |
| 1.3.2 假尿嘧啶化作用 | 第22-24页 |
| 1.4 铜绿假单胞菌毒性因子 | 第24-28页 |
| 1.4.1 绿脓菌素 | 第24-25页 |
| 1.4.2 三型分泌蛋白 | 第25页 |
| 1.4.3 鞭毛菌毛与运动 | 第25-26页 |
| 1.4.4 生物被膜 | 第26页 |
| 1.4.5 群体感应系统 | 第26-27页 |
| 1.4.6 全局调控基因rsmA | 第27-28页 |
| 1.5 研究内容和意义 | 第28-30页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第30-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第30-34页 |
| 2.1.1 菌株、质粒及引物列表 | 第30-32页 |
| 2.1.2 培养基的配置 | 第32-33页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第33页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第33-34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-38页 |
| 2.2.1 分子生物学实验方法 | 第34-36页 |
| 2.2.1.1 PCR、酶切以及连接体系 | 第34-35页 |
| 2.2.1.2 感受态细胞的制备 | 第35页 |
| 2.2.1.3 铜绿假单胞菌敲除突变体的构建 | 第35页 |
| 2.2.1.4 启动子-报道子载体的构建及基因表达水平的检测 | 第35页 |
| 2.2.1.5 操纵子验证 | 第35-36页 |
| 2.2.2 绿脓菌素的检测 | 第36页 |
| 2.2.3 高效液相-质谱检测吩嗪化合物 | 第36页 |
| 2.2.4 运动实验 | 第36页 |
| 2.2.5 PQS的提取及检测 | 第36-37页 |
| 2.2.6 壮观霉素对铜绿假单胞菌最小抑菌浓度MIC的检测 | 第37页 |
| 2.2.7 铜绿假单胞菌的CFU测定 | 第37-38页 |
| 第三章 实验结果 | 第38-58页 |
| 3.1 PA3114基因功能研究 | 第38-53页 |
| 3.1.1 缺失突变体PAO1(△PA3114)的构建与互补 | 第38-39页 |
| 3.1.1.1 缺失突变体PAO1(△PA3114)的构建 | 第38-39页 |
| 3.1.1.2 互补体PAO1(△PA3114 pAK3114)的构建 | 第39页 |
| 3.1.2 缺失突变体PAO1(△PA3114)的生长检测 | 第39-40页 |
| 3.1.3 PA3114与吩嗪合成的关系 | 第40-43页 |
| 3.1.3.1 吩嗪合成相关基因表达的测定 | 第40-41页 |
| 3.1.3.2 液体PB中测定吩嗪产量 | 第41-42页 |
| 3.1.3.3 高效液相测定吩嗪产物的量 | 第42-43页 |
| 3.1.4 PA3114与QS相关性研究 | 第43-46页 |
| 3.1.4.1 PQS合成相关基因的表达检测 | 第43-44页 |
| 3.1.4.2 PQS的提取及检测 | 第44-45页 |
| 3.1.4.3 其他QS系统相关基因的表达检测 | 第45-46页 |
| 3.1.5 PA3114影响T3SS表达 | 第46-47页 |
| 3.1.6 运动能力及生物被膜的检测 | 第47-49页 |
| 3.1.6.1 fimV基因表达情况 | 第47-48页 |
| 3.1.6.2 运动检测 | 第48页 |
| 3.1.6.3 电镜观察F的PAO1与突变体菌毛变化 | 第48-49页 |
| 3.1.7 基因PA3114影响表型的可能机理 | 第49-50页 |
| 3.1.8 讨论 | 第50-53页 |
| 3.2 壮观霉素的作用 | 第53-58页 |
| 3.2.1 菌体壮观霉素的MIC测定 | 第53页 |
| 3.2.2 亚抑菌浓度壮观霉素作用下吩嗪合成相关基因的表达 | 第53-54页 |
| 3.2.3 亚抑菌浓度壮观霉素对不同基因的调节 | 第54-55页 |
| 3.2.4 不同浓度壮观霉素对铜绿假单胞菌的影响 | 第55-56页 |
| 3.2.5 讨论 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
