| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 第一章 王浆蛋白及其酶解产物活性肽研究进展 | 第13-22页 |
| 1. 王浆中蛋白质的种类及生物活性 | 第13-15页 |
| ·王浆中蛋白质的种类 | 第13-14页 |
| ·王浆中蛋白质的生物活性 | 第14-15页 |
| 2 王浆蛋白酶解物的制备及分离纯化技术 | 第15-16页 |
| ·以鲜王浆或王浆冻干粉为原料的酶解技术 | 第15-16页 |
| ·以单一蛋白为底物的酶解技术 | 第16页 |
| ·酶解产物分离纯化技术 | 第16页 |
| 3. 王浆蛋白酶解产物的种类与生物活性 | 第16-19页 |
| ·抗氧化活性肽研究进展 | 第16-18页 |
| ·降血压活性肽研究进展 | 第18-19页 |
| 4. MRJPs在分子水平上的研究进展 | 第19页 |
| 5. 毕赤酵母表达系统概况 | 第19-22页 |
| 第二章 研究目的、意义及技术路线 | 第22-26页 |
| 1. 目的意义 | 第22-23页 |
| 2. 研究内容 | 第23-24页 |
| 3. 技术路线(本研究技术路线如图2-1所示) | 第24-26页 |
| 第三章 王浆主蛋白酶解工艺优化及产物活性研究 | 第26-43页 |
| 1 材料、试剂和设备 | 第26-27页 |
| ·实验材料 | 第26页 |
| ·实验试剂 | 第26-27页 |
| ·实验设备 | 第27页 |
| 2 实验方法 | 第27-31页 |
| ·酶解路线 | 第27页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第27-28页 |
| ·水解度测定 | 第28-29页 |
| ·王浆蛋白水解产物(H-MRJPs)的制备 | 第29页 |
| ·王浆蛋白水解产物(H-MRJPs)的初步分离 | 第29页 |
| ·抗氧化活性测定 | 第29-31页 |
| ·血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性 | 第31页 |
| ·数据统计及分析 | 第31页 |
| 3 实验结果 | 第31-41页 |
| ·原料预处理对酶解效果的影响 | 第31-32页 |
| ·水解条件单因素试验 | 第32-36页 |
| ·胃-胰蛋白酶共同作用的正交实验 | 第36-37页 |
| ·酶水解产物SDS-PAGE电泳检测 | 第37-38页 |
| ·超滤法分离王浆蛋白水解产物中的生物活性肽 | 第38-39页 |
| ·抗氧化活性检测 | 第39-40页 |
| ·血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性检测 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| 第四章 中华蜜蜂AccMRJP5基因克隆及在毕赤酵母中的表达 | 第43-59页 |
| 1 材料、试剂和设备 | 第43-46页 |
| ·实验材料及设备 | 第43-44页 |
| ·工具酶和试剂盒 | 第44页 |
| ·试剂的配制 | 第44-46页 |
| 2 实验方法 | 第46-51页 |
| ·引物设计及PCR扩增目的片段 | 第46-47页 |
| ·酵母表达载体构建 | 第47-49页 |
| ·电转化毕赤酵母 | 第49页 |
| ·多考贝克隆筛选 | 第49-50页 |
| ·阳性克隆诱导表达 | 第50页 |
| ·表达产物Western blot分析 | 第50-51页 |
| 3 实验结果 | 第51-57页 |
| ·AccMRJP5基因片段的获得 | 第51-52页 |
| ·酵母表达载体的构建及基因序列鉴定 | 第52-53页 |
| ·酵母电击转化及高表达重组酵母筛选 | 第53-55页 |
| ·AccMRJP5诱导表达及表达产物SDS-PAGE分析 | 第55-56页 |
| ·重组表达AccMRJP5的Western blot分析 | 第56-57页 |
| ·去糖基化产物SDS-PAGE检测 | 第57页 |
| 4. 讨论 | 第57-59页 |
| 第五章 AccMRJP5毕赤酵母表达产物纯化及活性研究 | 第59-67页 |
| 1 材料、试剂和设备 | 第59-60页 |
| ·实验材料及设备 | 第59页 |
| ·试剂的配制 | 第59-60页 |
| 2 实验方法 | 第60-62页 |
| ·AccMRJP5表达产物的分离纯化 | 第60页 |
| ·AccMRJP5去糖基化 | 第60-61页 |
| ·表达产物对家蚕细胞Rm-17生长的影响 | 第61-62页 |
| 3 实验结果 | 第62-66页 |
| ·重组表达AccMRJP5的分离纯化 | 第62-64页 |
| ·表达产物去糖基化 | 第64页 |
| ·重组AccMRJP5对家蚕细胞Rm-17生长的影响 | 第64-66页 |
| 4. 讨论 | 第66-67页 |
| 结论 | 第67-69页 |
| 1. 本研究主要研究成果及应用前景 | 第67页 |
| 2. 主要创新点 | 第67页 |
| 3. 今后研究方向 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第74页 |
