| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 文献综述 | 第11-24页 |
| 第一章 Α-甘露糖苷酶研究进展 | 第11-24页 |
| ·Α-AMA介绍 | 第11-15页 |
| ·α-AMA基因 | 第11-12页 |
| ·α-AMA的分类 | 第12-13页 |
| ·α-AMA的氨基酸序列 | 第13-14页 |
| ·α-AMA底物特异性 | 第14页 |
| ·α-AMA基因突变 | 第14页 |
| ·α-AMA在抗癌药物的应用 | 第14页 |
| ·α-AMA在其他方面的应用 | 第14-15页 |
| ·Α-AMA结构研究 | 第15-20页 |
| ·果蝇溶酶体 α-AMA | 第15页 |
| ·酿脓链球菌 α-AMA | 第15-19页 |
| ·牛溶酶体 α-AMA | 第19-20页 |
| ·Α-AMA酶的改造技术 | 第20-22页 |
| ·基因截短技术研究 | 第20-21页 |
| ·基因定点突变技术研究 | 第21-22页 |
| ·毕赤酵母表达 | 第22-24页 |
| 试验研究 | 第24-45页 |
| 第二章 山羊溶酶体 Α-甘露糖苷酶基因的截短双突变 | 第24-34页 |
| ·材料 | 第24-25页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·试验样品 | 第24-25页 |
| ·试验菌株及表达载体 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-28页 |
| ·重叠延伸PCR（overlap extension PCR）引物及截短引物设计 | 第25-26页 |
| ·重叠延伸PCR的反应体系 | 第26页 |
| ·重叠延伸PCR的反应步骤 | 第26页 |
| ·获取截短片段chT-A28-D58 | 第26-27页 |
| ·全长和截短突变 Α-AMA基因的重组酵母表达载体构建 | 第27-28页 |
| ·Α-AMA基因的毕赤酵母表达 | 第28页 |
| ·结果 | 第28-32页 |
| ·双突变全长片段的鉴定 | 第28-29页 |
| ·全长双突变基因的截短 | 第29-30页 |
| ·全长和截短双突变chLAM基因的克隆及测序 | 第30-31页 |
| ·重组毕赤酵母表达载体的构建 | 第31页 |
| ·重组酵母菌株基因组的PCR | 第31-32页 |
| ·讨论 | 第32-33页 |
| ·表达载体的构建 | 第32页 |
| ·chLAM基因的定点突变位点选择 | 第32-33页 |
| ·小结 | 第33-34页 |
| 第三章 毕赤酵母表达产物的鉴定、纯化及酶特性的测定 | 第34-45页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·主要仪器 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-37页 |
| ·重组酵母菌的诱导表达 | 第34页 |
| ·毕赤酵母表达产物的样品处理 | 第34-35页 |
| ·毕赤酵母表达产物的SDS-PAGE鉴定 | 第35页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第35页 |
| ·毕赤酵母表达产物的Western-blot鉴定 | 第35页 |
| ·毕赤酵母表达产物的纯化 | 第35页 |
| ·表达产物的酶活测定 | 第35-36页 |
| ·表达产物对SW敏感性测定 | 第36页 |
| ·表达产物的酶特性分析 | 第36-37页 |
| ·结果 | 第37-41页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE检测及纯化 | 第37页 |
| ·表达产物的蛋白质浓度测定 | 第37页 |
| ·表达产物的的western blot | 第37-38页 |
| ·表达产物的活性检测及其对SW敏感性的检测 | 第38-39页 |
| ·表达产物的酶特性分析 | 第39-41页 |
| ·讨论 | 第41-44页 |
| ·重组山羊溶酶体 α-AMA对SW敏感性 | 第41-42页 |
| ·重组酶的表达产量 | 第42页 |
| ·全长蛋白和截短双突变蛋白的活性测定 | 第42页 |
| ·表达产物的酶特性分析 | 第42-43页 |
| ·毕赤酵母表达产物的鉴定 | 第43-44页 |
| ·小结 | 第44-45页 |
| 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 作者简介 | 第51页 |
