| 摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-29页 |
| 1 CMYA1基因的研究进展 | 第14-16页 |
| 2 DGAT1基因的研究进展 | 第16-18页 |
| 3 本试验采用的技术 | 第18-27页 |
| ·启动子克隆 | 第18-21页 |
| ·定量PCR技术 | 第21-22页 |
| ·载体构建技术 | 第22-25页 |
| ·细胞的培养与转染 | 第25-27页 |
| ·细胞培养 | 第25-26页 |
| ·细胞转染 | 第26-27页 |
| 4 显微注射的研究进展 | 第27-28页 |
| 5 本研究的目的与意义 | 第28-29页 |
| 第二章 CMYA1基因核心启动子在牛肌肉细胞中的特异性表达 | 第29-34页 |
| 1 材料 | 第29页 |
| ·细胞和菌液 | 第29页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| 2 方法 | 第29-32页 |
| ·配置LB的液体培养基 | 第29页 |
| ·质粒的提取 | 第29-30页 |
| ·细胞培养 | 第30-31页 |
| ·细胞的复苏 | 第30-31页 |
| ·细胞的传代 | 第31页 |
| ·细胞的冻存 | 第31页 |
| ·XE载体转染牛的肌细胞和成纤维细胞 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-33页 |
| ·牛肌细胞的转染 | 第32页 |
| ·牛成纤维细胞的转染 | 第32-33页 |
| 4 讨论 | 第33-34页 |
| 第三章 牛CMYA1基因核心启动子高表达载体的构建及验证 | 第34-43页 |
| 1 材料 | 第34页 |
| ·工具酶和试剂 | 第34页 |
| ·仪器设备 | 第34页 |
| ·测序和引物合成 | 第34页 |
| 2 方法 | 第34-38页 |
| ·载体构建 | 第34-35页 |
| ·PCR反应 | 第34-35页 |
| ·质粒的酶切 | 第35页 |
| ·凝胶回收 | 第35页 |
| ·配置LB的固体培养基 | 第35-36页 |
| ·载体的连接 | 第36页 |
| ·载体的转化 | 第36-37页 |
| ·感受态的制备 | 第36页 |
| ·转化 | 第36-37页 |
| ·细胞转染 | 第37页 |
| ·细胞cDNA的获取 | 第37页 |
| ·RNA抽提 | 第37页 |
| ·反转录 | 第37页 |
| ·PCR以及RT-PCR检测 | 第37-38页 |
| 3 结果和分析 | 第38-41页 |
| ·载体构建 | 第38-39页 |
| ·细胞转染 | 第39-40页 |
| ·定量PCR | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| 第四章 小鼠受精卵发育中XD载体的影响 | 第43-49页 |
| 1 材料 | 第43页 |
| ·仪器和耗材 | 第43页 |
| ·试剂 | 第43页 |
| 2 方法 | 第43-46页 |
| ·移卵针、持卵针、注射针的制备 | 第43-44页 |
| ·移卵针的拉制 | 第43页 |
| ·持卵针的拉制 | 第43页 |
| ·注射针的拉制 | 第43-44页 |
| ·试验动物选择 | 第44页 |
| ·雌性小鼠的超数排卵 | 第44页 |
| ·受精卵的采集及体外培养 | 第44页 |
| ·显微操作 | 第44-46页 |
| ·注射针的准备 | 第44-45页 |
| ·显微操作系统的准备 | 第45页 |
| ·显微注射 | 第45-46页 |
| 3 结果和分析 | 第46-48页 |
| ·小鼠受精卵的收集 | 第46页 |
| ·XD载体浓度对小鼠受精卵发育的影响 | 第46-47页 |
| ·原和注射对小鼠受精卵发育的影响 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-49页 |
| 第五章 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 附录 | 第57-59页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第59页 |