| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-56页 |
| ·蛋白质药物简介 | 第14-15页 |
| ·蛋白质药物的聚乙二醇修饰 | 第15-19页 |
| ·聚乙二醇及聚乙二醇化蛋白质药物的性质 | 第15-17页 |
| ·聚乙二醇修饰蛋白质药物的研究进展 | 第17-19页 |
| ·蛋白质药物的聚乙二醇修饰策略 | 第19-33页 |
| ·聚乙二醇分子量的选择 | 第20-21页 |
| ·聚乙二醇形状的选择 | 第21-22页 |
| ·聚乙二醇修饰位点的选择 | 第22-30页 |
| ·随机修饰 | 第22-25页 |
| ·末端-NH_2修饰 | 第25-26页 |
| ·巯基定点修饰 | 第26-28页 |
| ·二硫键定点修饰 | 第28-29页 |
| ·酶催化介导的定点修饰 | 第29-30页 |
| ·特殊PEG修饰策略 | 第30-32页 |
| ·活性位点的保护 | 第30-31页 |
| ·可逆PEG修饰 | 第31页 |
| ·非共价PEG修饰 | 第31-32页 |
| ·固相修饰 | 第32-33页 |
| ·聚乙二醇化蛋白质药物的分离纯化 | 第33-37页 |
| ·按分子体积的不同进行分离 | 第33-35页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第33-34页 |
| ·超滤 | 第34-35页 |
| ·按静电作用力的不同进行分离 | 第35-36页 |
| ·按疏水性的不同进行分离 | 第36-37页 |
| ·聚乙二醇修饰蛋白质药物的表征和结构分析 | 第37-45页 |
| ·电泳法 | 第37-38页 |
| ·凝胶过滤高效液相色谱法 | 第38-39页 |
| ·反相高效液相色谱法 | 第39-40页 |
| ·质谱 | 第40页 |
| ·圆二色光谱 | 第40-41页 |
| ·荧光光谱 | 第41-42页 |
| ·动态光散射 | 第42-43页 |
| ·分析超离心 | 第43-44页 |
| ·红外光谱 | 第44页 |
| ·核磁共振技术 | 第44-45页 |
| ·聚乙二醇修饰蛋白质的药学性质分析 | 第45-47页 |
| ·表面等离子共振 | 第45-46页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第46-47页 |
| ·模型蛋白葡激酶的研究进展 | 第47-53页 |
| ·葡激酶的结构 | 第47-48页 |
| ·葡激酶的溶栓机理 | 第48-50页 |
| ·葡激酶的临床应用和免疫原性 | 第50-51页 |
| ·葡激酶改造研究进展 | 第51-53页 |
| ·定点突变 | 第51-52页 |
| ·融合蛋白 | 第52页 |
| ·聚乙二醇修饰 | 第52-53页 |
| ·论文的立题思想 | 第53-56页 |
| 2 基于连接桥的葡激酶C-末端定点修饰产物制备及鉴定 | 第56-80页 |
| ·引言 | 第56-58页 |
| ·实验材料与设备 | 第58-59页 |
| ·实验方法 | 第59-65页 |
| ·重组葡激酶的表达与纯化 | 第59-60页 |
| ·葡激酶的PEG定点修饰产物的制备与纯化 | 第60-61页 |
| ·修饰剂衍生物的合成 | 第60页 |
| ·葡激酶修饰产物的制备 | 第60-61页 |
| ·葡激酶修饰产物的纯化 | 第61页 |
| ·检测方法 | 第61-65页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第61-62页 |
| ·还原性SDS-PAGE | 第62-64页 |
| ·凝胶过滤高效液相色谱分析 | 第64页 |
| ·反相高效液相色谱分析 | 第64页 |
| ·傅里叶变换红外光谱 | 第64-65页 |
| ·核磁共振光谱 | 第65页 |
| ·质谱 | 第65页 |
| ·数据统计分析 | 第65页 |
| ·实验结果与讨论 | 第65-78页 |
| ·重组葡激酶的表达与纯化 | 第65-67页 |
| ·葡激酶的PEG定点修饰 | 第67-72页 |
| ·修饰剂衍生物的合成 | 第67-69页 |
| ·葡激酶修饰产物的制备 | 第69-70页 |
| ·葡激酶修饰产物的纯化 | 第70-72页 |
| ·葡激酶修饰产物的鉴定 | 第72-78页 |
| ·还原性SDS-PAGE | 第72-73页 |
| ·质谱 | 第73-75页 |
| ·凝胶过滤高效液相色谱 | 第75-76页 |
| ·反相高效液相色谱 | 第76-78页 |
| ·本章小结 | 第78-80页 |
| 3 基于连接桥的葡激酶定点修饰产物结构及药学性质研究 | 第80-120页 |
| ·引言 | 第80页 |
| ·实验材料与设备 | 第80-81页 |
| ·实验方法 | 第81-90页 |
| ·体外生物活性 | 第81-82页 |
| ·表面等离子共振 | 第82页 |
| ·圆二色光谱 | 第82-83页 |
| ·荧光光谱 | 第83-84页 |
| ·内源荧光光谱 | 第83页 |
| ·外源荧光光谱 | 第83页 |
| ·荧光淬灭 | 第83-84页 |
| ·动态光散射 | 第84页 |
| ·分析超离心 | 第84页 |
| ·蛋白水解酶敏感性 | 第84页 |
| ·免疫原性 | 第84-86页 |
| ·动物免疫 | 第85页 |
| ·血清中抗-SAK的IgG滴度测定 | 第85-86页 |
| ·药代动力学性质 | 第86-89页 |
| ·动物实验方案 | 第87页 |
| ·抗SAK多克隆抗体的纯化 | 第87-88页 |
| ·酶标抗体的制备 | 第88页 |
| ·血药浓度测定 | 第88-89页 |
| ·分子动力学模拟 | 第89-90页 |
| ·实验结果与讨论 | 第90-117页 |
| ·体外生物活性 | 第90-92页 |
| ·表面等离子共振 | 第92-95页 |
| ·圆二色光谱 | 第95-97页 |
| ·荧光光谱 | 第97-102页 |
| ·内源荧光光谱 | 第97-98页 |
| ·外源荧光光谱 | 第98-99页 |
| ·荧光淬灭 | 第99-102页 |
| ·动态光散射 | 第102-104页 |
| ·分析超离心 | 第104-106页 |
| ·蛋白水解酶敏感性 | 第106-109页 |
| ·免疫原性 | 第109-110页 |
| ·药代动力学性质 | 第110-115页 |
| ·抗SAK多克隆抗体的纯化 | 第110-112页 |
| ·酶标抗体的制备 | 第112-113页 |
| ·血药浓度测定 | 第113-115页 |
| ·分子动力学模拟 | 第115-117页 |
| ·本章小结 | 第117-120页 |
| 4 加热对PEG化SAK结构及活性的影响 | 第120-140页 |
| ·引言 | 第120-121页 |
| ·实验材料和仪器 | 第121页 |
| ·实验方法 | 第121-123页 |
| ·葡激酶的修饰产物的制备和纯化 | 第121-122页 |
| ·葡激酶的N-末端单一定点修饰产物的制备和纯化 | 第121-122页 |
| ·葡激酶的C-末端单一定点修饰产物的制备和纯化 | 第122页 |
| ·加热处理 | 第122-123页 |
| ·还原性SDS-PAGE | 第123页 |
| ·凝胶过滤高效液相色谱 | 第123页 |
| ·圆二色光谱 | 第123页 |
| ·内源荧光广谱 | 第123页 |
| ·分析超离心 | 第123页 |
| ·溶剂可及化表面积 | 第123页 |
| ·实验结果及讨论 | 第123-137页 |
| ·葡激酶修饰产物的分析鉴定 | 第123-125页 |
| ·葡激酶修饰产物经加热处理后的生物活性分析 | 第125-128页 |
| ·圆二色光谱法 | 第128-130页 |
| ·内源荧光光谱法 | 第130-132页 |
| ·凝胶过滤高效液相色谱 | 第132-133页 |
| ·分析超离心 | 第133-135页 |
| ·溶剂可及化表面积 | 第135-137页 |
| ·本章小结 | 第137-140页 |
| 5 结论与展望 | 第140-144页 |
| ·本论文的研究结果 | 第140-141页 |
| ·本论文的创新点 | 第141-142页 |
| ·今后的研究方向 | 第142-144页 |
| 符号表 | 第144-146页 |
| 参考文献 | 第146-160页 |
| 附录A 图目录 | 第160-162页 |
| 附录B 表目录 | 第162-164页 |
| 附录C 方程目录 | 第164-166页 |
| 个人简历及发表文章目录 | 第166-168页 |
| 致谢 | 第168页 |