| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 1 文献综述 | 第15-47页 |
| ·色谱技术在病毒和类病毒颗粒纯化中的应用 | 第15-18页 |
| ·色谱技术纯化病毒、类病毒颗粒的难点 | 第15-17页 |
| ·色谱技术纯化病毒、类病毒颗粒的解决方法 | 第17-18页 |
| ·超大孔色谱分离填料 | 第18-32页 |
| ·色谱分离填料发展历程 | 第18-19页 |
| ·超大孔色谱分离填料的优势 | 第19-20页 |
| ·超大孔色谱分离填料的种类以及应用 | 第20-30页 |
| ·超大孔填料分离纯化病毒、类病毒颗粒的研究现状 | 第30-32页 |
| ·蛋白质构象变化研究 | 第32-38页 |
| ·蛋白质在色谱分离中的构象变化的影响因素 | 第32-34页 |
| ·超大分子VLPs在色谱中构象变化的研究 | 第34-37页 |
| ·超大孔填料提高蛋白质在色谱中的构象稳定性 | 第37-38页 |
| ·蛋白质色谱过程中构象研究方法 | 第38-44页 |
| ·蛋白色谱过程中的热力学特征 | 第39-41页 |
| ·热力学基本原理 | 第39-41页 |
| ·蛋白质与色谱间相互作用对热力学参数的影响 | 第41页 |
| ·蛋白质色谱过程中的热力学研究方法 | 第41-44页 |
| ·Van't Hoff方程分析法 | 第41-42页 |
| ·等温滴定量热法 | 第42-44页 |
| ·超大孔填料分离纯化疫苗的研究展望 | 第44-45页 |
| ·本文研究内容和意义 | 第45-47页 |
| 2 适合于类病毒颗粒分离纯化的色谱填料筛选 | 第47-71页 |
| ·实验材料 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-53页 |
| ·离子交换色谱填料的表征 | 第49-50页 |
| ·动态结合载量 | 第50页 |
| ·HB-VLPs的离子交换色谱 | 第50-51页 |
| ·酶联免疫法和高效液相色谱法分析HB-VLPs | 第51页 |
| ·从重组汉逊酵母培养液中纯化HB-VLPs | 第51-52页 |
| ·HB-VLPs纯度检测 | 第52-53页 |
| ·实验结果与讨论 | 第53-69页 |
| ·色谱填料的基本物性 | 第53-54页 |
| ·离子交换填料孔径对不同分子量蛋白动态载量的影响 | 第54-57页 |
| ·蛋白在阴离子交换填料上的分离效果 | 第57-61页 |
| ·流速对于HB-VLPs色谱过程中回收率和结构的影响 | 第61-65页 |
| ·洗脱盐类型对于HB-VLPs回收率和结构的影响 | 第65-66页 |
| ·HB-VLPs的实际纯化 | 第66-69页 |
| ·本章小结 | 第69-71页 |
| 3 填料孔径对蛋白质色谱性质影响的规律研究 | 第71-103页 |
| ·实验材料 | 第73页 |
| ·实验方法 | 第73-76页 |
| ·逆体积色谱法测定填料可及孔隙体积和表观孔径 | 第73-74页 |
| ·等度洗脱 | 第74页 |
| ·吸附平衡实验 | 第74页 |
| ·吸附动力学 | 第74页 |
| ·动态结合载量 | 第74-75页 |
| ·激光共聚焦 | 第75-76页 |
| ·实验结果与讨论 | 第76-100页 |
| ·蛋白和填料的基本物性 | 第76-77页 |
| ·逆体积排阻色谱法对IEC填料孔径结构进行表征 | 第77-83页 |
| ·可及比表面积随IEC填料的孔径与蛋白大小比的变化 | 第83-85页 |
| ·静态吸附载量随着IEC填料的孔径与蛋白大小比的变化 | 第85-90页 |
| ·吸附解离常数随着IEC填料的孔径与蛋白大小比的变化 | 第90-91页 |
| ·吸附动力学随着IEC填料的孔径与蛋白大小比的变化 | 第91-95页 |
| ·动态载量随着IEC填料的孔径与蛋白大小比的变化 | 第95-96页 |
| ·根据CLSM观测研究蛋白质在IEC填料上的吸附动力学 | 第96-100页 |
| ·本章小结 | 第100-103页 |
| 4 超大孔离子交换填料提高类病毒颗粒的载量和稳定性 | 第103-125页 |
| ·实验材料 | 第105页 |
| ·实验方法 | 第105-109页 |
| ·定性离子交换填料 | 第105-106页 |
| ·吸附平衡实验 | 第106页 |
| ·动态结合载量 | 第106-107页 |
| ·吸附动力学 | 第107页 |
| ·激光共聚焦 | 第107-108页 |
| ·不同进料量的HB-VLPs的离子交换色谱 | 第108页 |
| ·酶联免疫法(ELISA)和高效液相色谱法分析HB-VLPs | 第108页 |
| ·透射电子显微镜法(TEM)分析 | 第108页 |
| ·从重组汉逊酵母培养液中纯化HB-VLPs | 第108-109页 |
| ·HB-VLPs纯度检测 | 第109页 |
| ·实验结果 | 第109-123页 |
| ·离子交换填料孔径大小对于HB-VLPs吸附平衡的影响 | 第109-113页 |
| ·HB-VLPs在不同孔径填料上的静态载量 | 第109-111页 |
| ·激光共聚焦显示孔径大小对于HB-VLPs吸附的影响 | 第111-113页 |
| ·IEC填料孔径大小对于吸附动力学的影响 | 第113-114页 |
| ·IEC填料孔径大小对于HB-VLPs动态载量的影响 | 第114-115页 |
| ·IEC填料孔径大小对于HB-VLPs色谱过程中回收率和结构的影响 | 第115-120页 |
| ·进料量对于HB-VLPs回收率和结构的影响 | 第115-118页 |
| ·相同进料量孔径大小对于HB-VLPs回收率和结构的影响 | 第118-120页 |
| ·HB-VLPs在四种填料上的实际纯化 | 第120-123页 |
| ·本章小结 | 第123-125页 |
| 5 超大孔填料促进HB-VLPs纯化过程中结构稳定性的热力学机理研究 | 第125-145页 |
| ·实验材料 | 第126-127页 |
| ·实验方法 | 第127-128页 |
| ·离子交换色谱填料的定性 | 第127页 |
| ·HB-VLPs完整颗粒在不同孔径填料上的离子交换色谱 | 第127页 |
| ·酶联免疫分析和高效液相色谱法分析HB-VLPs | 第127页 |
| ·HB-VLPs完整颗粒和HB-VLPs解聚体的定性 | 第127页 |
| ·不同孔径填料上的吸附平衡实验 | 第127-128页 |
| ·ITC实验：HB-VLPs完整颗粒和HB-VLPs解聚体 | 第128页 |
| ·实验结果与讨论 | 第128-143页 |
| ·色谱实验检测蛋白结构变化 | 第128-133页 |
| ·IEC填料的孔径对于HB-VLPs抗原回收率的影响 | 第128-129页 |
| ·IEC填料的孔径对于HB-VLPs结构的影响 | 第129-132页 |
| ·圆二色谱(CD) | 第132-133页 |
| ·孔径对于HB-VLPs完整颗粒和解聚体吸附平衡的影响 | 第133-134页 |
| ·等温滴定量热实验研究 | 第134-143页 |
| ·吸附热力学模型的建立 | 第134-136页 |
| ·HB-VLPs完整颗粒和解聚体的ITC实验确定模型参数 | 第136-137页 |
| ·孔径对于HB-VLPs完整颗粒和解聚体吸附焓变的影响 | 第137-140页 |
| ·关于ITC热力学参数的进一步分析和讨论 | 第140-143页 |
| ·本章小结 | 第143-145页 |
| 6 超大孔填料配基密度影响HB-VLPs结构稳定性的热力学机理研究 | 第145-163页 |
| ·实验材料 | 第145-146页 |
| ·实验方法 | 第146-147页 |
| ·制备不同配基密度的阴离子交换填料 | 第146页 |
| ·离子交换色谱填料的性能测定 | 第146页 |
| ·HB-VLPs在不同配基密度填料上的离子交换色谱 | 第146-147页 |
| ·酶联免疫分析和高效液相色谱法分析HB-VLPs | 第147页 |
| ·HB-VLPs完整颗粒和HB-VLPs解聚体的定性 | 第147页 |
| ·不同配基密度填料上的吸附平衡实验 | 第147页 |
| ·ITC实验：HB-VLPs完整颗粒和HB-VLPs解聚体 | 第147页 |
| ·实验结果与讨论 | 第147-160页 |
| ·色谱实验检测蛋白结构变化 | 第147-152页 |
| ·IEC填料配基密度对于HB-VLPs抗原回收率的影响 | 第147-149页 |
| ·IEC填料的配基密度对于HB-VLPs结构的影响 | 第149-151页 |
| ·圆二色谱(CD) | 第151-152页 |
| ·配基密度对于HB-VLPs完整颗粒和解聚体吸附平衡的影响 | 第152-153页 |
| ·等温滴定量热实验 | 第153-155页 |
| ·热力学模型阐明色谱过程HB-VLPs解聚体的形成 | 第153-154页 |
| ·ITC实验确定模型参数 | 第154页 |
| ·配基密度对IEC中HB-VLPs完整颗粒构象变化焓变的影响 | 第154-155页 |
| ·关于ITC热力学参数的进一步分析和讨论 | 第155-158页 |
| ·溶菌酶与不同配基密度填料相互作用的热力学 | 第158-160页 |
| ·本章小结 | 第160-163页 |
| 7 结论与展望 | 第163-167页 |
| ·本文的研究结果 | 第163-165页 |
| ·本文的创新点 | 第165页 |
| ·展望 | 第165-167页 |
| 符号表 | 第167-169页 |
| 参考文献 | 第169-183页 |
| 附录 A图目录 | 第183-187页 |
| 附录 B表目录 | 第187-189页 |
| 个人简历及发表文章目录 | 第189-191页 |
| 致谢 | 第191页 |
