缩略语索引表 | 第1-10页 |
摘要 | 第10-12页 |
ABSTRACT | 第12-14页 |
引言 | 第14-16页 |
第一部分 PURα促进食管癌细胞Caspase-8L的抗凋亡功能 | 第16-41页 |
摘要 | 第16-17页 |
Abstract | 第17-19页 |
引言 | 第19-22页 |
材料和方法 | 第22-32页 |
一、材料 | 第22-25页 |
1. 细胞系 | 第22页 |
2. 菌株与质粒 | 第22页 |
3. 抗体 | 第22页 |
4. 主要仪器 | 第22-23页 |
5. 主要试剂 | 第23-24页 |
6. 常用溶液的配制 | 第24-25页 |
二、方法 | 第25-32页 |
1. 细胞培养 | 第25-26页 |
2. 细胞全蛋白提取 | 第26页 |
3. Bradford法蛋白定量 | 第26页 |
4. Western blot analysis | 第26-27页 |
5. 免疫荧光 | 第27-28页 |
6. 质粒的扩增和提取 | 第28-29页 |
7. 稳定转染细胞系筛选 | 第29-30页 |
8. Caspase-8蛋白酶活检测 | 第30-32页 |
结果 | 第32-36页 |
1. PURα过表达食管癌细胞构建 | 第32-33页 |
·PURα在不同食管癌细胞中的表达 | 第32页 |
·PURα过表达载体构建 | 第32页 |
·PURα过表达细胞系筛选 | 第32-33页 |
2. PURα过表达抑制细胞凋亡 | 第33-36页 |
·PURα过表达上调食管癌细胞Caspase-8L表达 | 第33-34页 |
·PURα过表达促进食管癌细胞Caspase-8L胞浆转位 | 第34页 |
·Caspase-8L胞浆定位抑制外源凋亡通路的活化和促进细胞存活 | 第34-36页 |
讨论 | 第36-40页 |
小结 | 第40-41页 |
第二部分 PURα过表达引起食管癌细胞EMT | 第41-70页 |
摘要 | 第41-42页 |
Abstract | 第42-43页 |
前言 | 第43-44页 |
材料和方法 | 第44-46页 |
一、材料 | 第44页 |
1. 抗体 | 第44页 |
2. 试剂 | 第44页 |
二、方法 | 第44-46页 |
1. 免疫组织化学 | 第44-45页 |
2. WST-8法检测细胞生长 | 第45页 |
3. 细胞Transwell侵袭实验 | 第45页 |
4. 细胞划痕实验和划痕创伤愈合修复分析 | 第45-46页 |
结果 | 第46-60页 |
1. PURα在食管癌和癌旁食管上皮中的表达 | 第46-47页 |
2. KYSE 510-PURα和KYSE 510-pCMV6细胞转录组分析 | 第47-53页 |
4. 过表达PURα的KYSE 510细胞形态的检测 | 第53-55页 |
5. 过表达PURα对KYSE 510细胞生长影响 | 第55页 |
6. E-cadherin和Vimentin在KYSE 510-PURα细胞中的表达 | 第55-56页 |
7. EMT相关蛋白在PURα过表达细胞中的表达 | 第56-58页 |
8. KYSE 510-PURα细胞迁移能力的分析 | 第58页 |
9. KYSE 510-PURα细胞侵袭能力的分析 | 第58-60页 |
讨论 | 第60-69页 |
小结 | 第69-70页 |
第三部分 RIP3过表达增强食管癌细胞对顺铂的敏感性 | 第70-92页 |
摘要 | 第70-71页 |
Abstract | 第71-72页 |
前言 | 第72-73页 |
材料和方法 | 第73-77页 |
一、材料 | 第73-74页 |
1. 细胞系 | 第73页 |
2. 抗体 | 第73页 |
3. 菌株与质粒 | 第73页 |
4. siRNA | 第73-74页 |
二、方法 | 第74-77页 |
1. 细胞培养 | 第74页 |
2. 细胞转染 | 第74页 |
3. WST-8法检测细胞存活率 | 第74-75页 |
4. 顺铂处理细胞 | 第75页 |
5. 在HEK293T细胞RIP3基因的CRISPR/Cas9稳定敲除 | 第75-77页 |
结果 | 第77-82页 |
1. KYSE 140细胞敲降RIP3对顺铂敏感性的影响 | 第77页 |
2. KYSE 140细胞过表达RIP3对顺铂敏感性的影响 | 第77-78页 |
3. KYSE 510细胞过表达RIP3对顺铂敏感性的影响 | 第78页 |
4. MEF细胞过表达RIP3对顺铂敏感性的影响 | 第78-79页 |
5. HEK293T细胞敲除RIP3基因 | 第79-80页 |
6. HEK293T-RIP3KO细胞过表达RIP3对顺铂敏感性的影响 | 第80页 |
7. 过表达RIP3对HEK293T-RIP3KO细胞DNA损伤修复通路影响 | 第80-82页 |
讨论 | 第82-91页 |
小结 | 第91-92页 |
参考文献 | 第92-99页 |
文献综述 | 第99-112页 |
参考文献 | 第109-112页 |
个人简历 | 第112-114页 |
致谢 | 第114-115页 |
附件:研究生期间获奖证书和发表文章 | 第115-137页 |