| 摘要 | 第1-9页 |
| 文献综述 | 第9-16页 |
| 1 布鲁菌病概述 | 第9-10页 |
| 2 布鲁菌OMP28蛋白的研究进展 | 第10-12页 |
| 3 布鲁菌检测方法的研究进展 | 第12-14页 |
| ·免疫学检测 | 第12-13页 |
| ·分子生物学检测 | 第13-14页 |
| 4 本研究的目的意义 | 第14-16页 |
| 实验一 布鲁菌OMP28蛋白的原核表达及纯化 | 第16-27页 |
| 1 材料 | 第16-18页 |
| ·菌株、载体与主要试剂 | 第16页 |
| ·溶液的配制 | 第16-17页 |
| ·主要仪器 | 第17-18页 |
| 2 方法 | 第18-24页 |
| ·引物的设计与合成 | 第18页 |
| ·OMP28基因的扩增 | 第18页 |
| ·PCR扩增产物的纯化及回收 | 第18-19页 |
| ·原核表达载体pET-28(+)的制备 | 第19-20页 |
| ·重组质粒与目的基因的制备 | 第20-21页 |
| ·表达载体与目的基因的连接 | 第21页 |
| ·连接产物的转化 | 第21-22页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第22页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE鉴定 | 第22-23页 |
| ·OMP28重组蛋白的纯化 | 第23页 |
| ·纯化蛋白的浓度测定 | 第23-24页 |
| 3 结果与分析 | 第24-26页 |
| ·OMP28表达载体的构建结果 | 第24页 |
| ·表达质粒的双酶切鉴定结果 | 第24页 |
| ·重组质粒的序列测定结果 | 第24-26页 |
| ·重组蛋白的制备 | 第26页 |
| 4 小结 | 第26-27页 |
| 实验二 布鲁菌OMP28蛋白iELISA检测方法的建立 | 第27-40页 |
| 1 材料 | 第27-28页 |
| ·血清 | 第27页 |
| ·二抗与试剂 | 第27页 |
| ·试剂的配制 | 第27-28页 |
| 2 方法 | 第28-30页 |
| ·最佳抗原包被浓度和酶标二抗最佳稀释度的确定 | 第28页 |
| ·一抗稀释倍数的选择 | 第28页 |
| ·包被条件的选择 | 第28页 |
| ·封闭液的选择 | 第28页 |
| ·封闭时间的选择 | 第28-29页 |
| ·一抗作用时间的选择 | 第29页 |
| ·酶标二抗反应时间的选择 | 第29页 |
| ·显色液和显色时间的选择 | 第29页 |
| ·终止条件的选择 | 第29-30页 |
| ·ELISA方法临界值的确定 | 第30页 |
| ·特异性试验 | 第30页 |
| ·敏感性试验 | 第30页 |
| ·重复性试验 | 第30页 |
| ·对比试验 | 第30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-38页 |
| ·最佳抗原包被浓度和酶标二抗最佳稀释度的确定 | 第30-31页 |
| ·一抗稀释倍数的选择结果 | 第31页 |
| ·包被条件的选择结果 | 第31-32页 |
| ·封闭液的选择结果 | 第32-33页 |
| ·封闭时间的选择结果 | 第33-34页 |
| ·一抗作用时间的选择结果 | 第34页 |
| ·酶标二抗反应时间的选择结果 | 第34-35页 |
| ·显色液和显色时间的选择结果 | 第35页 |
| ·终止条件的选择结果 | 第35-36页 |
| ·ELISA方法临界值的确定 | 第36页 |
| ·特异性试验结果 | 第36-37页 |
| ·敏感性试验结果 | 第37-38页 |
| ·重复性试验结果 | 第38页 |
| ·对比试验结果 | 第38页 |
| 4 小结 | 第38-40页 |
| 实验三布鲁菌OMP28蛋白iELISA检测试剂盒的研制 | 第40-48页 |
| 1 材料 | 第40页 |
| 2 方法 | 第40-42页 |
| ·布鲁菌OMP28蛋白iELISA检测程序 | 第40页 |
| ·试剂盒酶标板的制备 | 第40页 |
| ·试剂盒标准对照血清的制备 | 第40-41页 |
| ·试剂盒酶标二抗的制备 | 第41页 |
| ·试剂盒洗涤液的制备 | 第41页 |
| ·试剂盒显色液的制备 | 第41页 |
| ·试剂盒终止液的制备 | 第41页 |
| ·试剂盒的组装 | 第41页 |
| ·试剂盒的特异性检测 | 第41页 |
| ·试剂盒的敏感性检测 | 第41页 |
| ·试剂盒的重复性检测 | 第41-42页 |
| ·试剂盒的保存性判定 | 第42页 |
| ·临床样品的检测 | 第42页 |
| 3 结果 | 第42-47页 |
| ·试剂盒酶标板的保存条件选择结果 | 第42页 |
| ·试剂盒标准对照血清中防腐剂的选择结果 | 第42-44页 |
| ·试剂盒的组装 | 第44页 |
| ·试剂盒使用说明书 | 第44-45页 |
| ·试剂盒的特异性检测结果 | 第45页 |
| ·试剂盒的敏感性检测结果 | 第45页 |
| ·试剂盒的重复性检测结果 | 第45-46页 |
| ·试剂盒的保存性判定结果 | 第46-47页 |
| ·临床样品的检测结果 | 第47页 |
| 4 小结 | 第47-48页 |
| 讨论 | 第48-51页 |
| 1 布鲁菌病iELISA检测方法包被抗原的选择 | 第48页 |
| 2 布鲁菌病iELISA检测方法的建立 | 第48-50页 |
| 3 布鲁菌OMP28蛋白iELISA检测试剂盒的研制 | 第50-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| Abstract | 第56-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
