| 目录 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| 1. 文献综述 | 第7-19页 |
| ·纤维素及纤维素酶 | 第7-11页 |
| ·产纤维素酶的微生物 | 第11-12页 |
| ·纤维素酶的基因工程研究进展 | 第12-13页 |
| ·黑曲霉表达体系的研究进展 | 第13-16页 |
| ·表达载体 | 第13页 |
| ·外源基因的转化方法及其优缺点 | 第13-14页 |
| ·筛选标记 | 第14-16页 |
| ·纤维素酶在现代工业中的应用 | 第16-17页 |
| ·本研究的目的、意义及内容 | 第17-19页 |
| 2. 材料与方法 | 第19-29页 |
| ·材料 | 第19-21页 |
| ·方法 | 第21-29页 |
| ·葡萄糖标准曲线的制作 | 第21-22页 |
| ·黑曲霉Y_(14)产纤维素酶活力的测定 | 第22-23页 |
| ·黑曲霉Y_(14)原生质体的制备及再生 | 第23-24页 |
| ·里氏木霉cbh1表达载体的构建 | 第24-28页 |
| ·氏木霉cbh1基因的扩增 | 第24-26页 |
| ·PCR产物与载体的酶切回收 | 第26页 |
| ·目的片段与表达载体的连接 | 第26页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第26-27页 |
| ·重组质粒大肠杆菌的转化 | 第27页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定和测序鉴定 | 第27-28页 |
| ·重组表达质粒pPTRⅡ-cbh1转化黑曲霉Y_(14) | 第28-29页 |
| ·转化子的筛选 | 第28页 |
| ·转化子的PCR检测 | 第28页 |
| ·转化子酶活力测定 | 第28-29页 |
| 3. 结果与分析 | 第29-46页 |
| ·黑曲霉Y_(14)纤维素酶活力测定结果 | 第29-31页 |
| ·黑曲霉Y_(14)原生质体制备条件的确定 | 第31-33页 |
| ·不同培养方式对原生质体制备的影响 | 第31页 |
| ·不同菌龄对原生质体制备的影响 | 第31-32页 |
| ·不同酶解液对原生质体制备的影响 | 第32-33页 |
| ·不同渗透压溶液对原生质体再生率的影响 | 第33页 |
| ·里氏木霉cbh1表达载体的构建 | 第33-43页 |
| ·重组质粒的构建方法 | 第33-34页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第35页 |
| ·重组质粒的测序鉴定 | 第35-43页 |
| ·重组质粒转化黑曲霉Y_(14) | 第43-46页 |
| ·转化子的筛选 | 第43页 |
| ·转化子的PCR鉴定 | 第43-44页 |
| ·转化子外切葡聚糖酶活力测定 | 第44-45页 |
| ·转化子总酶活力测定 | 第45-46页 |
| 4. 讨论 | 第46-47页 |
| 5. 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| Abstract | 第52-54页 |
| 致谢 | 第54页 |