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黄瓜叶片质膜水通道蛋白基因的表达分析与克隆

摘要第1-5页
ABSTRACT第5-7页
目录第7-10页
1 文献综述第10-21页
   ·研究目的和意义第10页
   ·水通道蛋白的研究进展第10-12页
     ·水通道蛋白的发现第10-11页
     ·植物水通道蛋白研究的理论背景第11-12页
       ·植物水分运动的影响因素第11页
       ·植物细胞中水分跨膜运输方式第11-12页
   ·植物水通道蛋白的多样性及分类第12-13页
   ·植物水通道蛋白的基本特征第13-14页
     ·植物水通道蛋白的结构第13-14页
     ·植物水通道蛋白的分布和含量第14页
   ·植物水通道蛋白的表达调控第14-17页
     ·植物水通道蛋白转录水平层次的调控第14-16页
       ·生长发育阶段的调控第15页
       ·环境胁迫因子调控第15页
       ·植物激素调控第15页
       ·其他转录水平调控第15-16页
     ·植物水通道蛋白转录后水平的调控第16-17页
       ·磷酸化调控和 Ca2+调节第16页
       ·糖基化调控第16页
       ·基因异聚化调控第16页
       ·pH 调控第16-17页
       ·压力和溶质梯度调控第17页
     ·植物水通道蛋白膜运输的调控第17页
   ·植物水通道蛋白的生理功能第17-19页
     ·植物水通道蛋白的运输功能第17页
       ·水分的长距离运输第17页
       ·水分的跨膜快速运输第17页
       ·运输其他小分子物质第17页
     ·渗透调节作用第17-18页
       ·调节细胞的胀缩第18页
       ·维持水势的平衡第18页
     ·植物生长发育中的作用第18-19页
       ·细胞的伸长和分化第18页
       ·叶片的发育第18页
       ·有性繁殖与开花第18页
       ·果实的成熟和种子的萌发、成熟第18-19页
   ·植物水通道蛋白耐旱研究第19-20页
   ·研究内容与技术路线第20-21页
     ·主要研究内容第20页
     ·研究技术路线第20-21页
2 材料与方法第21-38页
   ·材料第21-23页
     ·试验材料第21页
     ·试验处理第21页
     ·载体与菌株第21页
     ·生化试剂与酶第21-22页
     ·PCR 引物第22-23页
   ·方法第23-38页
     ·黄瓜 PIP 基因的生物信息学分析第23页
     ·黄瓜 PIP1 和 PIP2 亚家族基因的荧光定量第23-25页
       ·利用 RNAiso Plus(Total RNA)试剂盒提取 RNA第23-24页
       ·RNA 的反转录实验第24页
       ·荧光定量 PCR 检测 PIP1 和 PIP2 的基因表达变化第24-25页
     ·黄瓜 Csa019689 基因的克隆第25-31页
       ·利用 RNAiso Plus(Total RNA)试剂盒提取 RNA第25-26页
       ·RNA 的反转录实验第26页
       ·分离黄瓜 PIP 中的 Csa019689 基因第26-27页
       ·PCR 产物的回收第27-28页
       ·PCR 产物与 T 载体的连接反应第28页
       ·连接产物转化感受态细胞第28-29页
       ·菌落的挑选以及摇菌第29页
       ·菌液 PCR 的鉴定第29-30页
       ·大肠杆菌内质粒 DNA 的提取第30页
       ·克隆载体酶切验证第30-31页
       ·DNA 序列测定与分析第31页
     ·黄瓜 PIP 基因 Csa019689 的表达载体的构建第31-35页
       ·表达载体引物设计第31页
       ·PCR 扩增第31-32页
       ·克隆载体和表达载体的酶切第32-33页
       ·酶切产物回收及电泳检测第33页
       ·目的片段与载体片段的连接第33页
       ·连接产物转化大肠杆菌感受态细胞第33页
       ·菌落的挑选以及摇菌第33页
       ·菌液 PCR 的鉴定第33-34页
       ·DNA 序列检测第34页
       ·表达载体质粒的提取第34-35页
     ·农杆菌介导的 GV3103 对拟南芥的遗传转化第35-38页
       ·连接产物转化感受态细胞第35-36页
       ·菌落的筛选摇菌第36页
       ·菌液 PCR 的鉴定第36-37页
       ·农杆菌侵染拟南芥第37-38页
3 结果与分析第38-50页
   ·黄瓜 PIP 基因的生物信息学分析第38-40页
     ·黄瓜叶片 PIP 基因与拟南芥响应干旱胁迫 PIP 基因的同源性比较第38页
     ·黄瓜 PIP 基因的编码蛋白的性质分析第38-40页
   ·黄瓜 PIP1 和 PIP2 亚家族的基因表达分析第40-44页
     ·PIP 基因在 PEG6000 模拟干旱胁迫条件下的表达模式分析第40-44页
   ·黄瓜 Csa019689 基因的克隆第44-46页
     ·黄瓜叶片总 RNA 的提取以及纯度检测第44-45页
     ·黄瓜 Csa019689 基因全长 cDNA 的克隆与菌液检测第45页
     ·Csa019689 基因的测序结果比对第45-46页
   ·黄瓜 Csa019689 基因的表达载体的构建第46-49页
     ·pCAMBIA2301 表达载体的构建第46-47页
     ·大肠杆菌阳性转化子的 PCR 验证和酶切鉴定第47-48页
     ·农杆菌中重组质粒的 PCR 检测第48-49页
   ·黄瓜基因 Csa019689 对拟南芥的遗传转化第49-50页
     ·转基因拟南芥植株 T0 代种子的收获第49-50页
4 讨论第50-52页
5 结论第52-53页
参考文献第53-57页
附录第57-59页
致谢第59页

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