| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-23页 |
| 1 P-type ATPase研究进展 | 第13-15页 |
| ·P-type ATPase概述 | 第13页 |
| ·P-ATPases家族分类 | 第13-15页 |
| ·P1-ATPases亚家族 | 第13-14页 |
| ·P2-ATPases亚家族 | 第14-15页 |
| ·P3-ATPases亚家族 | 第15页 |
| ·P4-ATPases亚家族 | 第15页 |
| ·P5-ATPases亚家族 | 第15页 |
| 2 P4-ATPases研究进展 | 第15-18页 |
| ·P4-ATPases催化磷脂转运的证据 | 第15-16页 |
| ·P4-ATPases催化磷脂转运的机制 | 第16-18页 |
| ·P4-ATPases在内吞及囊泡形成中的作用 | 第18页 |
| 3 病毒诱导的基因沉默技术研究进展 | 第18-21页 |
| ·VIGS的发现 | 第18-19页 |
| ·VIGS作用机制 | 第19-20页 |
| ·VIGS在基因功能验证方面的应用 | 第20-21页 |
| 4 研究目的及意义 | 第21-23页 |
| 第二部分 研究报告 | 第23-51页 |
| 第一章 Gbpatp基因沉默对棉花抗寒性的影响 | 第23-39页 |
| 1 材料与方法 | 第23-33页 |
| ·植物材料 | 第23页 |
| ·菌种、载体和引物 | 第23-24页 |
| ·Gbpatp基因的克隆 | 第24-27页 |
| ·棉花叶片总RNA的提取 | 第24页 |
| ·cDNA的合成 | 第24页 |
| ·Gbpatp基因全长的获得 | 第24-25页 |
| ·PCR产物的回收 | 第25页 |
| ·PCR产物加A | 第25-26页 |
| ·目的片段与T载体的连接 | 第26页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 | 第26页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第26-27页 |
| ·Gbpatp基因生物信息学分析 | 第27页 |
| ·VIGS载体pTRV1-Gbpatp的构建 | 第27-30页 |
| ·Gbpatp基因片段的扩增 | 第27页 |
| ·PCR产物清洁 | 第27页 |
| ·VIGS载pTRV1和清洁产物的SpeⅠ/PacⅠ的酶切 | 第27页 |
| ·酶切产物胶回收 | 第27-28页 |
| ·载体与目的片段连接 | 第28页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌DH5α | 第28页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第28页 |
| ·阳性质粒DNA的序列测定 | 第28页 |
| ·阳性克隆质粒(载体pTRV1-Gbpatp基因片段)的提取 | 第28-29页 |
| ·阳性克隆质粒(pTRV1-Gbpatp基因片段)的双酶切验证 | 第29页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第29页 |
| ·重组载体的农杆菌转化 | 第29-30页 |
| ·菌落PCR验证及菌液保存 | 第30页 |
| ·陆地棉鲁21中Gbpatp基因的沉默 | 第30页 |
| ·VIGS棉花中Gbpatp基因表达量分析 | 第30-31页 |
| ·棉花叶片RNA的提取 | 第30页 |
| ·cDNA的合成 | 第30页 |
| ·Gbpatp基因的定量PCR检测 | 第30-31页 |
| ·Gbpatp基因对棉花抗寒性的影响 | 第31-33页 |
| ·低温诱导对Hai7124中Gbpatp基因表达量的影响 | 第31页 |
| ·低温处理对VIGS棉花的表型影响 | 第31页 |
| ·低温处理对VIGS棉花中MDA含量及CAT活力的影响 | 第31-33页 |
| 2 结果与分析 | 第33-39页 |
| ·Gbpatp基因在低温诱导下的表达模式 | 第33页 |
| ·Gbpatp基因的生物信息学分析 | 第33-34页 |
| ·VIGS载体的验证 | 第34-35页 |
| ·VIGS沉默Gbpatp基因 | 第35-36页 |
| ·沉默Gbpatp基因降低棉花对低温胁迫的抵抗性 | 第36-37页 |
| ·低温处理对沉默Gbpatp同源基因的棉花中MDA和CAT的影响 | 第37-39页 |
| 第二章 Gbpatp基因过量表达对烟草抗寒性及耐旱性的影响 | 第39-51页 |
| 1 材料与方法 | 第39-42页 |
| ·试验材料 | 第39页 |
| ·转Gbpatp基因烟草的筛选及鉴定 | 第39-40页 |
| ·T2代再生烟草的潮霉素筛选 | 第39页 |
| ·烟草DNA提取 | 第39页 |
| ·烟草RNA提取及cDNA合成 | 第39-40页 |
| ·T2代再生烟草的分子检测 | 第40页 |
| ·Gbpatp基因过量表达对烟草生长速率的影响 | 第40页 |
| ·Gbpatp基因过量表达对烟草抗旱性的影响 | 第40-41页 |
| ·PEG高渗溶液配制 | 第40-41页 |
| ·种子干旱胁迫处理 | 第41页 |
| ·种子萌发指标的测定 | 第41页 |
| ·烟苗的生长指标测定 | 第41页 |
| ·Gbpatp基因过量表达对烟草抗寒性的影响 | 第41-42页 |
| ·表型观察 | 第41页 |
| ·低温处理前后Gbpatp基因过量表达烟草中MDA和CAT测定 | 第41-42页 |
| 2 结果与分析 | 第42-51页 |
| ·转Gbpatp基因烟草T2植株的潮霉素筛选 | 第42页 |
| ·转Gbpatp基因烟草T2植株分子鉴定 | 第42-43页 |
| ·Gbpatp基因过量表达提高烟草生长速率 | 第43-44页 |
| ·Gbpatp基因过量表达提高烟草抗旱性 | 第44-49页 |
| ·不同浓度PEG处理对转基因烟草种子萌发的影响 | 第44-45页 |
| ·不同浓度PEG处理对转基因烟草种子发芽指数和发芽均日的影响 | 第45-46页 |
| ·不同浓度PEG处理对转基因烟草幼苗生长指标的影响 | 第46-49页 |
| ·Gbpatp基因过量表达提高烟草对低温胁迫的抵抗性 | 第49页 |
| ·低温处理对Gbpatp基因过量表达烟草中MDA和CAT的影响 | 第49-51页 |
| 全文讨论 | 第51-55页 |
| 1 Gbpatp基因与植物耐低温能力相关 | 第51-53页 |
| 2 Gbpatp基因与植物生长相关 | 第53-54页 |
| 3 Gbpatp基因与植物耐旱能力相关 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 全文结论 | 第63-65页 |
| 附录 | 第65-67页 |
| 硕士期间发表的学术论文 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
