| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-15页 |
| 第一章 引言与文献综述 | 第15-37页 |
| ·肠毒素大肠杆菌ETEC K88 | 第15-17页 |
| ·大肠杆菌 | 第15页 |
| ·肠毒素大肠杆菌(ETEC) | 第15-16页 |
| ·ETEC菌毛 | 第16页 |
| ·ETEC K88和K88菌毛 | 第16-17页 |
| ·大肠杆菌引起的仔猪腹泻 | 第17-18页 |
| ·仔猪黄痢 | 第17页 |
| ·仔猪白痢 | 第17页 |
| ·断奶仔猪腹泻 | 第17-18页 |
| ·大肠杆菌的检测方法 | 第18-25页 |
| ·标准检测方法和血清型鉴定 | 第18-20页 |
| ·新型快速检测方法 | 第20-25页 |
| ·用于大肠杆菌检测的生物探针 | 第25-29页 |
| ·核酸(DNA)探针 | 第25-26页 |
| ·抗体探针 | 第26-27页 |
| ·适配体探针 | 第27-29页 |
| ·适配体 | 第29-34页 |
| ·适配体与靶目标的结合 | 第29-30页 |
| ·适配体的筛选(SELEX技术) | 第30-33页 |
| ·适配体作为探针与抗体的比较优势 | 第33-34页 |
| ·本课题研究的工作思路和主要内容 | 第34-37页 |
| 第二章 K88菌毛蛋白的提取纯化和单克隆抗体的制备 | 第37-65页 |
| ·实验仪器与材料 | 第37-41页 |
| ·主要仪器 | 第37-38页 |
| ·菌种和培养基 | 第38页 |
| ·实验动物及细胞 | 第38页 |
| ·主要试剂配制 | 第38-41页 |
| ·其他试剂 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-49页 |
| ·ETEC K88菌毛蛋白的制备 | 第41-44页 |
| ·ETEC K88菌毛蛋白的单克隆抗体制备 | 第44-46页 |
| ·K88菌毛蛋白单克隆抗体生物素标记及Western Blot鉴定 | 第46-47页 |
| ·K88菌毛蛋白单克隆抗体亲和力测定 | 第47-48页 |
| ·K88菌毛蛋白单克隆抗体效价测定 | 第48页 |
| ·K88菌毛蛋白单克隆抗体与ETEC K88的结合性能分析 | 第48-49页 |
| ·K88菌毛蛋白单克隆抗体与ETEC K88的结合特异性分析 | 第49页 |
| ·基于K88菌毛蛋白单克隆抗体的ABS-ELISA体系对K88菌毛蛋白的检测灵敏度分析 | 第49页 |
| ·实验结果与讨论 | 第49-62页 |
| ·ETEC K88菌毛蛋白的制备 | 第49-54页 |
| ·ETEC K88菌毛蛋白单克隆抗体的筛选和制备 | 第54-57页 |
| ·K88菌毛蛋白单克隆抗体效价测定 | 第57-58页 |
| ·K88菌毛蛋白单克隆抗体的亲和力测定 | 第58-59页 |
| ·K88菌毛蛋白单克隆抗体与ETEC K88的结合性能分析 | 第59-60页 |
| ·K88菌毛蛋白单克隆抗体与ETEC K88的结合特异性分析 | 第60-61页 |
| ·基于K88菌毛蛋白单克隆抗体的ABS-ELISA体系检测ETECK88菌毛蛋白的灵敏度分析 | 第61-62页 |
| ·讨论和小结 | 第62-65页 |
| 第三章 EIECK88菌毛蛋白适配体的筛选、鉴定及利用Aptamer-ABS-ELISA方法快速分析ETEC K88菌毛蛋白 | 第65-82页 |
| ·实验仪器与材料 | 第65-67页 |
| ·主要仪器 | 第65-66页 |
| ·菌种和培养基 | 第66页 |
| ·主要试剂配制 | 第66页 |
| ·其他试剂 | 第66-67页 |
| ·随机SSDNA文库的构建以及引物合成 | 第67页 |
| ·适配体的合成和修饰 | 第67页 |
| ·实验方法 | 第67-73页 |
| ·细菌的准备和稀释平板菌落计数(MPN) | 第67-68页 |
| ·ETEC K88菌毛蛋白的制备 | 第68页 |
| ·SELEX过程 | 第68-70页 |
| ·胶回收纯化ssDNA文库 | 第70页 |
| ·富集文库与K88菌毛蛋白的结合率分析 | 第70-71页 |
| ·测序 | 第71页 |
| ·克隆序列分析及二级结构预测 | 第71页 |
| ·K88菌毛蛋白适配体亲和力测定 | 第71页 |
| ·K88菌毛蛋白适配体和ETEC K88的结合性能分析 | 第71-72页 |
| ·K88菌毛蛋白适配体与ETEC K88的结合特异性分析 | 第72页 |
| ·基于适配体的Aptamer-ABS-ELISA法检测ETEC K88菌毛蛋白体系检测ETEC K88的灵敏度分析 | 第72-73页 |
| ·实验结果 | 第73-79页 |
| ·富集文库与K88菌毛蛋白的结合率分析 | 第73-74页 |
| ·克隆序列一级结构序列同源性分析 | 第74-75页 |
| ·候选适配体二级结构预测 | 第75页 |
| ·候选K88菌毛蛋白适配体与ETEC K88的结合性能分析 | 第75-76页 |
| ·K88菌毛蛋白适配体亲和力测定 | 第76-77页 |
| ·K88菌毛蛋白适配体和ETEC K88的结合性能分析 | 第77页 |
| ·K88菌毛蛋白适配体与ETEC K88的结合特异性分析 | 第77-78页 |
| ·基于K88菌毛蛋白适配体的APTAMER-ABS-ELISA法检测ETEC K88菌毛蛋白体系的灵敏度分析 | 第78-79页 |
| ·讨论和小结 | 第79-82页 |
| 第四章 不同CELL-SELEX技术筛选ETEC K88细胞适配体 | 第82-101页 |
| ·实验仪器与材料 | 第82-85页 |
| ·主要仪器 | 第82-83页 |
| ·菌种和培养基 | 第83页 |
| ·主要试剂配制 | 第83-84页 |
| ·其他试剂 | 第84页 |
| ·随机SSDNA文库的构建以及引物合成 | 第84页 |
| ·适配体的合成和修饰 | 第84-85页 |
| ·实验方法 | 第85-89页 |
| ·细菌的准备和稀释平板菌落计数(MPN) | 第85页 |
| ·经典CELL-SELEX过程(离心分离法) | 第85页 |
| ·荧光磁珠法CELL-SELEX(FLUMAG-CELL-SELEX)过程 | 第85-86页 |
| ·SSDNA文库的胶回收和纯化 | 第86页 |
| ·反筛(COUNTER-SELEX) | 第86-87页 |
| ·富集文库与K88菌毛蛋白的结合率分析 | 第87页 |
| ·测序 | 第87页 |
| ·克隆序列分析及二级结构预测 | 第87页 |
| ·K88免疫磁珠(K88 IMB)的可靠性研究 | 第87-89页 |
| ·实验结果 | 第89-98页 |
| ·K88 IMB的可靠性研究 | 第89-92页 |
| ·经典SELEX技术筛选ETEC K88细胞适配体 | 第92-94页 |
| ·FLUMAG-CELL-SELEX技术筛选ETEC K88细胞适配体 | 第94-97页 |
| ·两种SELEX技术筛选ETEC K88细胞适配体对比 | 第97-98页 |
| ·讨论和小结 | 第98-101页 |
| 第五章 基于细胞适配体/细胞适配体文库直接荧光探针分析与免疫磁分离技术相结合快速检测ETEC K88研究 | 第101-115页 |
| ·实验仪器与材料 | 第101-103页 |
| ·主要仪器 | 第101-102页 |
| ·菌种和培养基 | 第102页 |
| ·主要试剂配制 | 第102页 |
| ·其他试剂 | 第102-103页 |
| ·适配体的合成和修饰 | 第103页 |
| ·实验方法 | 第103-106页 |
| ·细菌的准备和稀释平板菌落计数(MPN) | 第103页 |
| ·FITC修饰的适配体文库的扩增 | 第103页 |
| ·ETEC K88细胞适配体亲和力测定 | 第103-104页 |
| ·ETEC K88细胞适配体和细胞适配体文库(Aptamer library)与ETEC K88的结合性能分析 | 第104页 |
| ·基于细胞适配体/适配体文库的直接荧光分析法-IMS技术相结合快速分析检测ETEC K88 | 第104-106页 |
| ·实验结果 | 第106-112页 |
| ·ETEC K88细胞适配体亲和力测定 | 第106-107页 |
| ·ETEC K88细胞适配体和细胞适配体文库与ETEC K88的结合性能分析 | 第107-108页 |
| ·基于细胞适配体/适配体文库的直接荧光探针分析-IMS技术相结合快速分析检测ETEC K88 | 第108-112页 |
| ·讨论和小结 | 第112-115页 |
| 第六章 结论和展望 | 第115-118页 |
| ·结论 | 第115-116页 |
| ·展望 | 第116-118页 |
| 参考文献 | 第118-130页 |
| 攻读博士学位期间撰写、发表的学术论文 | 第130-132页 |
| 致谢 | 第132-133页 |
