| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第一篇 人类PRS催化和调节机制的结构生物学基础研究 | 第11-63页 |
| 第1章 PRS1研究进展 | 第11-23页 |
| ·PRS是一类重要的酶 | 第11-12页 |
| ·PRS1催化的反应 | 第11页 |
| ·PRS的催化产物PRPP是众多反应的共同底物 | 第11-12页 |
| ·PRS家族蛋白 | 第12-13页 |
| ·人类PRS分类 | 第13页 |
| ·人的PRS1与若干重大疾病之间的直接关系 | 第13-17页 |
| ·PRS1超活性疾病 | 第14-15页 |
| ·Arts综合征 | 第15-16页 |
| ·CMTX5或者Rosenberg-Chutorian综合征 | 第16-17页 |
| ·DFN2综合征 | 第17页 |
| ·PRS1超活性与Arts综合征兼有的新突变 | 第17页 |
| ·PRS1与癌症的关系 | 第17页 |
| ·PRS1突变引起疾病目前的临床治疗方案 | 第17-19页 |
| ·PRS结构生物学研究进展 | 第19-21页 |
| ·本篇拟解决的问题 | 第21-23页 |
| 第2章 PRS1的催化机制及可能的致病机理研究 | 第23-57页 |
| ·实验材料与方法 | 第23-28页 |
| ·人类PRS1蛋白的基因克隆及表达质粒的构建 | 第23-25页 |
| ·PRS1及其突变体蛋白的表达及纯化 | 第25-26页 |
| ·晶体生长及数据收集 | 第26页 |
| ·PRS1及其突变体的结构解析 | 第26-27页 |
| ·PRS1及其底物复合物的电镜样品制备、数据收集及三维重构 | 第27页 |
| ·PRS1及相关突变体的酶酶动力学常数测定 | 第27-28页 |
| ·实验结果 | 第28-46页 |
| ·PRS1蛋白纯化及纯度鉴定 | 第28页 |
| ·PRS1晶体的初筛及优化 | 第28-29页 |
| ·PRS1及其突变体的结构解析及模型质量评估 | 第29-32页 |
| ·野生型PRS1的整体结构 | 第32-34页 |
| ·PRS1及其与不同底物的负染电镜照片结构 | 第34-35页 |
| ·PRS1电镜结构的三维重构 | 第35-36页 |
| ·PRS1的六体四级结构相互作用面 | 第36-38页 |
| ·PRS1的活性位点 | 第38-43页 |
| ·PRS家族蛋白中存在的两种构象变化 | 第43-44页 |
| ·RS1突变体E43T,D65N,A87T,M115T和Q133P的晶体结构 | 第44-46页 |
| ·实验结果讨论 | 第46-57页 |
| ·六聚体是PRS1发挥功能的基本单位 | 第47-48页 |
| ·PRS1催化机制模型 | 第48-54页 |
| ·PRS1与疾病相关突变体分析 | 第54-57页 |
| 本篇小结 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 第二篇 PRS1 D52H突变的致病机理研究 | 第63-83页 |
| 第1章 PRS1突变引起疾病的致病机制研究进展 | 第63-69页 |
| ·PRS1的致病突变体 | 第63页 |
| ·PRS1若干突变体的致病机制研究进展 | 第63-67页 |
| ·本篇拟解决的问题 | 第67-69页 |
| 第2章 PRS1 D52H突变的致病机理研究 | 第69-79页 |
| ·实验材料与方法 | 第69-71页 |
| ·人类PRS1 D52H突变体的构建及表达纯化 | 第69页 |
| ·D52H晶体生长数据收集及结构解析 | 第69-70页 |
| ·酶相对活性分析 | 第70页 |
| ·ITC实验检测ADP结合能力 | 第70-71页 |
| ·实验结果 | 第71-78页 |
| ·PRS1野生型和D52H突变体蛋白表达纯化 | 第71页 |
| ·D52H突变体的晶体生长 | 第71-72页 |
| ·D52H突变体的结构解析及模型质量评估 | 第72-73页 |
| ·D52H突变体的整体结构 | 第73-74页 |
| ·PRS1及D52H突变体催化活力比较 | 第74-75页 |
| ·D52H与PRS1结构上的差别 | 第75-77页 |
| ·PRS1 D52H突变体对抑制剂ADP结合能力的变化测试 | 第77页 |
| ·PRS1 D52H突变体对抑制剂ADP灵敏性测试 | 第77-78页 |
| ·实验结果讨论 | 第78-79页 |
| 本篇小结 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-83页 |
| 第三篇 与PRS1相关蛋白的研究 | 第83-109页 |
| 第1章 PRS1相关蛋白概述 | 第83-93页 |
| ·PRS1活性相关蛋白及其研究进展 | 第83-89页 |
| ·PRS1活性相关蛋白 | 第83-86页 |
| ·PRS1活性相关蛋白结构生物学研究进展 | 第86-89页 |
| ·PRS1其他相互作用相关蛋白研究进展 | 第89-92页 |
| ·本篇拟解决的问题 | 第92-93页 |
| 第2章 PAP39是PRS1的激活因子研究 | 第93-105页 |
| ·实验材料与方法 | 第93-98页 |
| ·人类PAP39蛋白,PRS1无标签及P300 KIX结构域无标签的基因克隆及表达质粒的构建 | 第93-96页 |
| ·PAP39蛋白的表达及纯化 | 第96-98页 |
| ·PAP39蛋白的表达 | 第96页 |
| ·PAP39蛋白的纯化 | 第96页 |
| ·PAP39 与 PRS1 相互作用 Pul I down 实验 | 第96-97页 |
| ·PRS1与P300 KIX结构域相互作用Pu 11 down实验 | 第97页 |
| ·PAP39及PAP39-PRS1复合物酶动力学常数测定 | 第97-98页 |
| ·实验结果 | 第98-102页 |
| ·PAP39蛋白纯化及纯度鉴定 | 第98页 |
| ·PAP39与PRS1相互作用Pull down实验 | 第98-99页 |
| ·PRS1与p300 KIX结构域相互作用Pull down实验 | 第99-100页 |
| ·PAP39及PAP39-PRS1复合物酶动力学常数测定 | 第100-101页 |
| ·PAP39,PAP39-PRS1及PRS1-KIX结构域的晶体初筛 | 第101页 |
| ·PAP39,PAP39-PRS1及PAP39-PRS1用5nm金颗粒标记复合物负染电镜结构 | 第101-102页 |
| ·实验结果讨论 | 第102-105页 |
| ·PRS1相关蛋白及蛋白质复合物的纯化 | 第102页 |
| ·PRS1相关蛋白及蛋白质复合物的晶体初筛 | 第102页 |
| ·PAP39及PAP39-PRS1复合物酶动力学常数测定分析 | 第102-105页 |
| 本篇小结 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-109页 |
| 致谢 | 第109-111页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的研究成果 | 第111页 |
