| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 第一章 研究背景及意义 | 第11-37页 |
| ·研究背景 | 第11-36页 |
| ·sRNA的种类、特点和功能 | 第11-17页 |
| ·siRNA | 第11-14页 |
| ·miRNA | 第14-16页 |
| ·piRNA | 第16-17页 |
| ·其他sRNA | 第17页 |
| ·sRNA通路的重要蛋白 | 第17-22页 |
| ·RNaseⅢ家族蛋白 | 第18-19页 |
| ·Argonaute蛋白 | 第19-22页 |
| ·GW182 | 第22页 |
| ·DSB的产生和特点 | 第22-27页 |
| ·DSB的产生和特点 | 第22-23页 |
| ·人工诱导DSB的定点发生 | 第23-25页 |
| ·DNA损伤反应(DDR) | 第25-27页 |
| ·DSB的修复 | 第27-32页 |
| ·NHEJ通路 | 第28-29页 |
| ·HR通路 | 第29-31页 |
| ·SSA通路 | 第31页 |
| ·DSB修复通路的选择 | 第31-32页 |
| ·sRNA与DNA损伤修复的关系 | 第32-36页 |
| ·miRNA与DNA损伤修复 | 第33-34页 |
| ·其他sRNA与DNA损伤修复 | 第34-36页 |
| ·本研究的意义 | 第36-37页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第37-56页 |
| ·实验材料 | 第37页 |
| ·细胞系 | 第37页 |
| ·试剂 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-56页 |
| ·细胞培养 | 第38-39页 |
| ·细胞的复苏 | 第38页 |
| ·细胞的传代培养 | 第38页 |
| ·细胞的冻存 | 第38-39页 |
| ·细胞的药物处理和IR处理 | 第39页 |
| ·细胞的转染 | 第39-41页 |
| ·siRNA转染 | 第39-40页 |
| ·质粒转染 | 第40页 |
| ·siRNA和质粒共转染 | 第40-41页 |
| ·质粒的构建 | 第41-46页 |
| ·PCR扩增目标片段 | 第41页 |
| ·PCR产物的琼脂糖凝胶纯化 | 第41-42页 |
| ·PCR产物末端加A | 第42页 |
| ·连接pMD19T载体 | 第42-43页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第43页 |
| ·碱裂解法小量提取大肠杆菌质粒 | 第43页 |
| ·Quick-change法构建定点突变质粒 | 第43-44页 |
| ·酶切 | 第44页 |
| ·连接目的载体 | 第44-45页 |
| ·转染用质粒的中量提取(去内毒素) | 第45-46页 |
| ·半定量RT-CR检测基因表达水平 | 第46-48页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第46页 |
| ·DNA酶消化总RNA中的DNA | 第46-47页 |
| ·RNA反转合成cDNA第一链 | 第47页 |
| ·半定量PCR | 第47-48页 |
| ·Western blot检测蛋白表达水平 | 第48-50页 |
| ·细胞中总蛋白的提取和浓度测定 | 第48页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶的配制 | 第48-49页 |
| ·Western blot | 第49-50页 |
| ·HR和NHEJ实验 | 第50-51页 |
| ·HR 实验 | 第50-51页 |
| ·NHEJ实验 | 第51页 |
| ·细胞周期分析 | 第51页 |
| ·免疫共沉淀实验分析蛋白-蛋白相互作用 | 第51-52页 |
| ·免疫荧光染色和显微镜观察 | 第52-53页 |
| ·免疫荧光染色 | 第52-53页 |
| ·显微镜观察 | 第53页 |
| ·ssDNA分析实验 | 第53-54页 |
| ·RNA回补实验 | 第54-56页 |
| ·从总RNA中分离19-28nt的小RNA | 第54-55页 |
| ·RNA回补的HR实验 | 第55页 |
| ·RNA回补的免疫荧光染色实验 | 第55-56页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第56-78页 |
| ·实验结果 | 第56-75页 |
| ·Ago2和diRNA特异性参与HR修复 | 第56-63页 |
| ·Ago2和Dicer参与HR修复 | 第56-58页 |
| ·Ago2是4个Ago中唯一参与HR的Ago蛋白 | 第58-59页 |
| ·Ago2和Dicer参与HR不是通过miRNA | 第59-60页 |
| ·diRNA参与HR | 第60-61页 |
| ·diRNA参与HR不是通过调控细胞周期的方式 | 第61-62页 |
| ·diRNA特异性地参与HR而不参与NHEJ | 第62-63页 |
| ·小结 | 第63页 |
| ·Ago2能与Rad51相互作用 | 第63-66页 |
| ·Ago2能与Rad51相互作用 | 第63-64页 |
| ·Ago2与Rad51的相互作用能被IR所增强 | 第64-65页 |
| ·Ago2与Rad51的相互作用依赖于ATM和ATR | 第65-66页 |
| ·小结 | 第66页 |
| ·Ago2募集Rad51到DSB位点 | 第66-70页 |
| ·Ago2影响Rad51在DSB位点的聚集 | 第66-67页 |
| ·Ago2不影响DNA损伤处理后细胞内ssDNA的形成 | 第67-69页 |
| ·Ago2不影响Mrell、RPA在DSB位点的聚集 | 第69-70页 |
| ·小结 | 第70页 |
| ·Rad51介导HR修复依赖于Ago2/diRNA复合物 | 第70-75页 |
| ·Ago2与Rad51的相互作用不依赖于diRNA | 第70-71页 |
| ·Rad51募集到DSB位点依赖于Ago2/diRNA复合物 | 第71-73页 |
| ·Rad51介导HR修复依赖于Ago2/diRNA复合物 | 第73-74页 |
| ·小结 | 第74-75页 |
| ·讨论 | 第75-78页 |
| 参考文献 | 第78-92页 |
| 附录 | 第92-98页 |
| 攻读博士期间发表的论文 | 第98-99页 |
| 致谢 | 第99-101页 |
