| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一部分 | 第11-64页 |
| 第一章 引言 | 第11-21页 |
| 1 ZBTB 蛋白家族的结构特点 | 第11-12页 |
| ·BTB/POZ 结构域 | 第11-12页 |
| ·C２H２型锌指基序 | 第12页 |
| 2 锌指蛋白的研究进展 | 第12-14页 |
| ·锌指蛋白与 DNA 的识别作用 | 第12-13页 |
| ·锌指蛋白与 RNA 的识别作用 | 第13-14页 |
| ·C２H２型锌指蛋白同时识别 DNA 与 RNA 两类分子 | 第14页 |
| ·锌指蛋白与蛋白之间的相互作用 | 第14页 |
| 3 酵母双杂交技术的进展及其应用 | 第14-21页 |
| ·酵母双杂交技术的原理 | 第15-16页 |
| ·酵母双杂交系统的特点及优点 | 第16-17页 |
| ·酵母双杂交系统的缺陷性 | 第17-18页 |
| ·酵母双杂交系统的拓展 | 第18-20页 |
| ·酵母双杂交系统的应用 | 第20-21页 |
| ·展望 | 第21页 |
| 第二章 酵母双杂交筛选与 ZBTB1 蛋白相互作用的蛋白 | 第21-48页 |
| 1 实验材料 | 第22-25页 |
| ·菌株和质粒 | 第22页 |
| ·试剂 | 第22-23页 |
| ·酵母培养基 | 第23页 |
| ·氨基酸 | 第23-24页 |
| ·分子生物学工具酶 | 第24页 |
| ·分子生物学试剂盒 | 第24页 |
| ·抗体 | 第24页 |
| ·实验仪器 | 第24-25页 |
| 2 实验方法 | 第25-42页 |
| ·pGBKT-7-ZBTB1 诱饵载体构建 | 第25-28页 |
| ·诱饵蛋白在酵母中毒性检测 | 第28-29页 |
| ·构建于 AD 载体的 cDNA 文库的扩增 | 第29-30页 |
| ·诱饵蛋白自身激活报道基因的活性检测——pGBKT7-ZBTB1 与 pGADT7 小规模共转化酵母 AH10920 | 第30-31页 |
| ·酵母双杂交筛选与 ZBTB1 相互作用蛋白——文库质粒大规模转化已携带诱饵质粒的酵母 | 第31-32页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第32-34页 |
| ·酵母质粒的提取 | 第34-35页 |
| ·大肠杆菌质粒提取 | 第35页 |
| ·蛋白相互作用的验证——pGBKT7-ZBTB1 与 pGADT-7-Y 小规模共转化酵母 | 第35-36页 |
| ·测序及序列比对 | 第36-37页 |
| ·相关培养基和试剂的配制 | 第37-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-48页 |
| ·诱饵载体的构建与表达 | 第42-43页 |
| ·诱饵蛋白在酵母中毒性检测 | 第43页 |
| ·pGBKT7-ZBTB1 自激活检测 | 第43-44页 |
| ·酵母双杂交初步筛选结果 | 第44-45页 |
| ·酵母质粒抽提并转化大肠杆菌 | 第45-46页 |
| ·回转验证 | 第46页 |
| ·测序比对结果 | 第46-48页 |
| 4 小结 | 第48页 |
| 第三章 免疫共沉淀检测蛋白互作 | 第48-56页 |
| 1 实验材料 | 第48-50页 |
| ·菌株、细胞及质粒 | 第48页 |
| ·培养基 | 第48-49页 |
| ·细胞培养相关试剂 | 第49页 |
| ·细胞转染相关试剂 | 第49页 |
| ·细胞裂解液 | 第49页 |
| ·抗体 | 第49页 |
| ·蛋白酶抑制剂 | 第49页 |
| ·仪器 | 第49-50页 |
| 2 实验方法 | 第50-52页 |
| ·pCMV-Myc-MAPT 载体构建 | 第50页 |
| ·pCMV-HA-ZBTB1 载体构建 | 第50页 |
| ·细胞培养 | 第50-51页 |
| ·免疫共沉淀实验 | 第51-52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-54页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第52页 |
| ·重组质粒的表达 | 第52-54页 |
| ·免疫共沉淀实验 | 第54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-64页 |
| 第二部分 RTN4 基因多态性与肺癌相关性的研究 | 第64-77页 |
| 第一章 引言 | 第64-65页 |
| 第二章 RTN4 基因插入/缺失多态性与肺癌易感性研究 | 第65-74页 |
| 1 实验材料 | 第65-67页 |
| ·实验仪器与试剂 | 第65-67页 |
| ·血样的收集 | 第67页 |
| 2 实验方法 | 第67-70页 |
| ·实验所需试剂配制 | 第67-68页 |
| ·基因组 DNA 的提取 | 第68-69页 |
| ·PCR 扩增 | 第69页 |
| ·制胶 | 第69页 |
| ·电泳 | 第69-70页 |
| ·银染 | 第70页 |
| ·观察记录结果 | 第70页 |
| ·统计学分析 | 第70页 |
| 3 结果与分析 | 第70-73页 |
| ·目的片段的扩增 | 第70-71页 |
| ·411 例肺癌患者和 478 例正常人的 RTN4 基因多态性分布情况 | 第71-72页 |
| ·Hardy-Weinberg 平衡 | 第72-73页 |
| ·RTN4 基因 CAA 插入/缺失多态性与肺癌易感性的分析 | 第73页 |
| 4 讨论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
