| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1.引言 | 第12-18页 |
| ·禽网状内皮组织增殖症及禽网状内皮增殖症病毒 | 第12-14页 |
| ·禽网状内皮组织增生病概述 | 第12页 |
| ·REV生物学特征 | 第12-13页 |
| ·传播途径 | 第13页 |
| ·发病机理 | 第13页 |
| ·临床症状 | 第13-14页 |
| ·危害 | 第14页 |
| ·防治措施 | 第14页 |
| ·禽网状内皮组织增殖病的实验室诊断技术研究进展 | 第14-16页 |
| ·病毒的分离鉴定 | 第14-15页 |
| ·抗体的检测 | 第15页 |
| ·抗原的检测 | 第15-16页 |
| ·分子诊断技术 | 第16页 |
| ·鉴别诊断 | 第16页 |
| ·实验室诊断技术的意义 | 第16-18页 |
| 2.REV聚合酶链式反应(PCR)检测方法的建立 | 第18-26页 |
| ·材料 | 第18页 |
| ·聚合酶及其他试剂 | 第18页 |
| ·实验材料 | 第18页 |
| ·仪器 | 第18页 |
| ·方法 | 第18-21页 |
| ·PCR的引物设计 | 第18-19页 |
| ·REV增殖，RNA的提取及反转录 | 第19页 |
| ·PCR扩增 | 第19-20页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第20页 |
| ·PCR扩增产物的测序鉴定 | 第20-21页 |
| ·最佳反应模式的确定 | 第21页 |
| ·PCR检测方法敏感性的检测 | 第21页 |
| ·PCR检测方法特异性的检测 | 第21页 |
| ·重复性和稳定性试验 | 第21页 |
| ·结果 | 第21-24页 |
| ·REV PCR扩增结果 | 第21-22页 |
| ·PCR反应条件的优化 | 第22页 |
| ·PCR检测方法敏感性的检测 | 第22页 |
| ·PCR检测方法特异性的检测 | 第22-24页 |
| ·重复性和稳定性试验结果 | 第24页 |
| ·讨论 | 第24-26页 |
| 3.REV SYBR Green Ⅰ实时荧光检测方法的建立 | 第26-35页 |
| ·材料 | 第26页 |
| ·实验材料 | 第26页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-28页 |
| ·引物的设计与合成 | 第26页 |
| ·REV增殖, RNA的提取及反转录 | 第26-27页 |
| ·标准品的制备 | 第27页 |
| ·荧光定量最佳反应模式的确定 | 第27页 |
| ·标准曲线、熔解曲线的绘制 | 第27页 |
| ·特异性试验 | 第27-28页 |
| ·敏感性试验 | 第28页 |
| ·重复性试验 | 第28页 |
| ·样品检测 | 第28页 |
| ·结果 | 第28-33页 |
| ·标准曲线的建立 | 第28页 |
| ·特异性试验 | 第28-31页 |
| ·敏感性试验将 | 第31-32页 |
| ·重复性试验 | 第32-33页 |
| ·样品检测 | 第33页 |
| ·讨论 | 第33-35页 |
| 4.REV间接ELISA检测方法的建立 | 第35-49页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·实验试剂 | 第35页 |
| ·实验材料 | 第35页 |
| ·主要仪器 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-40页 |
| ·禽网状内皮组织増殖病病毒pET32a-gp90原核表达载体构建 | 第35-37页 |
| ·pET32a-gp90蛋白的原核表达和鉴定 | 第37-38页 |
| ·pET32a-gp90基因片段表达产物的Westenr Blot分析 | 第38页 |
| ·pET32a-gp90基因片段原核表达蛋白的纯化 | 第38页 |
| ·pET32a-gp90间接ELISA检测方法的建立 | 第38-40页 |
| ·特异性试验 | 第40页 |
| ·间接ELISA重复性试验 | 第40页 |
| ·抗体间接ELISA与同类商品化试剂盒的对比 | 第40页 |
| ·实验结果 | 第40-47页 |
| ·pET32a-gp90基因片段重组表达载体的鉴定 | 第40-41页 |
| ·pET32a-gp90基因片段在大肠杆菌中的表达 | 第41-42页 |
| ·表达蛋白的Western-blotting分析 | 第42页 |
| ·pET32a-gp90基因片段原核表达蛋白的可溶性分析 | 第42-43页 |
| ·pET32a-gp90基因片段表达产物的纯化分析 | 第43页 |
| ·pET32a-gp90蛋白间接ELISA方法的建立 | 第43-46页 |
| ·pET32a-gp90蛋白间接ELISA特异性检测 | 第46页 |
| ·pET32a-gp90蛋白间接ELISA重复性试验 | 第46-47页 |
| ·pET32a-gp90蛋白间接ELISA与同类商品化试剂盒的对比 | 第47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| 5.三种检测方法的比较 | 第49-50页 |
| 6.结论 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 附录 | 第56-58页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第58页 |
