| 摘要 | 第1-17页 |
| Abstract | 第17-20页 |
| 1 前言 | 第20-36页 |
| ·干扰素概述 | 第20-26页 |
| ·干扰素的产生和分类 | 第21-22页 |
| ·干扰素的分子结构 | 第22-23页 |
| ·干扰素的理化特性 | 第23-24页 |
| ·干扰素的生物学活性 | 第24-26页 |
| ·禽干扰素的研究概况 | 第26-31页 |
| ·禽 I 型干扰素 | 第26-27页 |
| ·禽Ⅱ型干扰素 | 第27-28页 |
| ·禽 III 型干扰素 | 第28-29页 |
| ·鹅α-干扰素概述 | 第29-31页 |
| ·酵母表达系统概述 | 第31-35页 |
| ·酵母表达系统的优点 | 第31-32页 |
| ·两种酵母表达系统 | 第32-35页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第35-36页 |
| 2 材料与方法 | 第36-53页 |
| ·材料 | 第36-38页 |
| ·试验动物、禽胚、细胞 | 第36页 |
| ·质粒、载体、菌株、和毒株 | 第36页 |
| ·引物设计与合成 | 第36-37页 |
| ·主要试剂及抗体 | 第37页 |
| ·主要仪器 | 第37-38页 |
| ·鹅α-干扰素多克隆抗体的制备 | 第38-40页 |
| ·重组菌 BL21/pWL-GoIFN-α的鉴定 | 第38-39页 |
| ·大肠杆菌表达 GoIFN-α与纯化 | 第39页 |
| ·GoIFN-α多抗血清的制备及效价检测 | 第39-40页 |
| ·鹅α-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达 | 第40-49页 |
| ·鹅α-干扰素原始基因的获得 | 第40-42页 |
| ·重组质粒 pPICZαA-GoIFN-α的构建及鉴定 | 第42-45页 |
| ·重组表达载体 pPICZαA-GoIFN-α的转化入毕赤酵母 GS115 | 第45-48页 |
| ·重组表达载体 pPICZαA-GoIFN-α的转化入毕赤酵母 X33 | 第48页 |
| ·鹅α干扰素在毕赤酵母中的表达 | 第48-49页 |
| ·高密度发酵工艺的初步研究 | 第49-50页 |
| ·种子液的制备 | 第49页 |
| ·发酵罐的组装与灭菌 | 第49页 |
| ·高密度发酵重组毕赤酵母 | 第49-50页 |
| ·发酵重组蛋白的检测 | 第50页 |
| ·鹅α-干扰素抗病毒活性的测定 | 第50-53页 |
| ·病毒的制备及效价测定 | 第50页 |
| ·重组 GoIFN-α蛋白抗病毒活性的测定 | 第50-53页 |
| 3 结果与分析 | 第53-74页 |
| ·鹅α-干扰素多克隆抗体的制备 | 第53-55页 |
| ·重组菌 BL21/pWL-GoIFN-α的鉴定 | 第53页 |
| ·大肠杆菌表达鹅α-干扰素表达与纯化 | 第53-54页 |
| ·多克隆抗体血清效价检测结果 | 第54-55页 |
| ·鹅α-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达 | 第55-66页 |
| ·pPICZαA-GoIFN-α酵母表达载体的构建 | 第55-59页 |
| ·重组酵母的鉴定 | 第59-61页 |
| ·GoIFN-α在毕赤酵母中的表达及鉴定 | 第61-64页 |
| ·Dot-ELISA 比较重组酵母的表达量 | 第64页 |
| ·不同甲醇诱导浓度对蛋白表达量的影响 | 第64-66页 |
| ·高密度发酵表达重组 GoIFN-α | 第66-69页 |
| ·不同时间点酵母菌体湿重 | 第66-67页 |
| ·间接 ELISA 法检测重组 GoIFN-α蛋白的表达 | 第67页 |
| ·SDS-PAGE 检测重组蛋白的表达及蛋白表达量 | 第67-69页 |
| ·重组 GoIFN-α抗病毒活性分析 | 第69-74页 |
| ·摇瓶发酵表达的重组 GoIFN-α蛋白抗病毒效价 | 第69-70页 |
| ·高密度培养毕赤酵母表达重组蛋白的抗病毒活性 | 第70页 |
| ·不同时间点表达重组蛋白的抗病毒活性 | 第70-71页 |
| ·不同浓度重组鹅α干扰素对病毒增殖的影响 | 第71-72页 |
| ·重组 GoIFN-α蛋白的抗病毒活性阻断分析 | 第72-74页 |
| 4 讨论 | 第74-84页 |
| ·表达载体的选择 | 第74页 |
| ·获得无冗余氨基酸鹅α-干扰素的策略 | 第74-75页 |
| ·不同转化方法的选择 | 第75-77页 |
| ·重组鹅 IFN-α生物学活性 | 第77-78页 |
| ·糖基化修饰对蛋白的影响 | 第78-79页 |
| ·提高外源蛋白表达策略 | 第79-81页 |
| ·高密度发酵培养技术的初步探索 | 第81-84页 |
| 5 结论 | 第84-86页 |
| 致谢 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-99页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第99页 |
