| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-31页 |
| ·细菌性果斑病 | 第13-18页 |
| ·细菌性果斑病的危害 | 第13-14页 |
| ·细菌性果斑病菌–西瓜食酸菌 | 第14-16页 |
| ·西瓜食酸菌的群体结构和寄主范围特点 | 第16-18页 |
| ·基因功能研究策略―转座子插入诱变 | 第18-23页 |
| ·Tn5 转座子插入诱变的分子机制 | 第19-21页 |
| ·Tn5 转座子插入诱变在基因功能研究中的应用 | 第21-23页 |
| ·植物病原细菌致病性机制的研究现状 | 第23-28页 |
| ·细菌与植物互作的类型以及致病相关的概念 | 第23页 |
| ·植物病原细菌致病相关因子 | 第23-28页 |
| ·西瓜食酸菌致病机制的研究现状 | 第28-29页 |
| ·本研究的目的意义和技术路线 | 第29-31页 |
| ·目的意义 | 第29页 |
| ·技术路线 | 第29-31页 |
| 第二章 西瓜食酸菌—黄瓜互作模式病害体系的建立 | 第31-43页 |
| ·引言 | 第31-32页 |
| ·材料、仪器与试剂 | 第32页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第32页 |
| ·材料 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-34页 |
| ·材料的培养与接种 | 第32-33页 |
| ·植物材料的培养 | 第32-33页 |
| ·西瓜食酸菌的培养和菌悬液制备 | 第33页 |
| ·接种 | 第33页 |
| ·BFB 病害严重度测定以及叶组织内病原菌群体数量的检测 | 第33-34页 |
| ·植物发病组织病原菌的分离与鉴定 | 第34页 |
| ·结果分析 | 第34-41页 |
| ·用于西瓜食酸菌–黄瓜互作体系的菌株和黄瓜品种 | 第34-37页 |
| ·西瓜食酸菌与黄瓜离体叶片的互作 | 第37-38页 |
| ·西瓜食酸菌与黄瓜果实、活体幼苗的互作 | 第38-41页 |
| ·讨论 | 第41-42页 |
| ·小结 | 第42-43页 |
| 第三章 西瓜食酸菌的转座子插入诱变和致病性改变突变体的筛选 | 第43-56页 |
| ·引言 | 第43页 |
| ·材料、仪器与试剂 | 第43-45页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第43-44页 |
| ·材料 | 第44-45页 |
| ·实验方法 | 第45-50页 |
| ·大肠杆菌的遗传转化 | 第45页 |
| ·双亲结合法制备 Tn5 转座子插入诱变突变体 | 第45-46页 |
| ·菌株的选择与培养 | 第45-46页 |
| ·突变体的制备 | 第46页 |
| ·西瓜食酸菌的 Tn5 转座频率计算 | 第46页 |
| ·候选突变体的阳性检测 | 第46页 |
| ·质粒挽救法获取西瓜食酸菌基因组 Tn5 侧翼序列信息 | 第46-48页 |
| ·突变体基因组 DNA 的提取 | 第47页 |
| ·基因组 DNA 的酶切 | 第47页 |
| ·基因组 DNA 酶切产物的自连接 | 第47页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第47页 |
| ·Tn5 侧翼序列片段的获得 | 第47-48页 |
| ·生物信息学分析 | 第48页 |
| ·Southern 杂交分析 | 第48-49页 |
| ·探针的设计 | 第48页 |
| ·待测 DNA 样品的制备和琼脂糖凝胶电泳分离 | 第48-49页 |
| ·转膜 | 第49页 |
| ·探针标记、预杂交及杂交 | 第49页 |
| ·转座子插入诱变突变体稳定性分析 | 第49-50页 |
| ·突变体致病性检测 | 第50页 |
| ·结果与分析 | 第50-54页 |
| ·西瓜食酸菌菌株较难进行转座子插入诱变 | 第50-51页 |
| ·获得较高质量的西瓜食酸菌突变体库 | 第51-54页 |
| ·西瓜食酸菌-黄瓜模式体系筛选获得致病性改变突变体 | 第54页 |
| ·讨论 | 第54-55页 |
| ·小结 | 第55-56页 |
| 第四章 西瓜食酸菌的致病必需因子非鞭毛Ⅲ型分泌系统 ATPase 蛋白 | 第56-69页 |
| ·引言 | 第56-57页 |
| ·材料、仪器与试剂 | 第57-59页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第57页 |
| ·材料 | 第57-59页 |
| ·实验方法 | 第59-64页 |
| ·材料的培养和接种 | 第59页 |
| ·材料的培养 | 第59页 |
| ·菌悬液的制备 | 第59页 |
| ·接种 | 第59页 |
| ·BFB 病害严重度测定及叶组织内病原菌群体的检测 | 第59页 |
| ·hrcN 表达载体的构建 | 第59-62页 |
| ·目的基因 hrcN 克隆 | 第59-61页 |
| ·重组质粒 pHC60-hrcN 的构建 | 第61-62页 |
| ·质粒转化细菌 | 第62页 |
| ·质粒转化大肠杆菌 | 第62页 |
| ·质粒转化西瓜食酸菌 | 第62页 |
| ·NF-T3SS ATPase 的聚类分析和 T3SS 的系统进化分析 | 第62-64页 |
| ·结果与分析 | 第64-67页 |
| ·预测 T3SS ATPase 缺失菌株表型和基因鉴定 | 第64-65页 |
| ·HrcN 是西瓜食酸菌的致病性和 NF-T3SS 功能的必需因子 | 第65-66页 |
| ·预测的 T3SS ATPase 的聚类分析 | 第66-67页 |
| ·西瓜食酸菌 T3SS 的系统进化分析 | 第67页 |
| ·讨论 | 第67-68页 |
| ·小结 | 第68-69页 |
| 第五章 西瓜食酸菌的毒性因子葡萄糖抑制分裂型蛋白 A | 第69-84页 |
| ·引言 | 第69-70页 |
| ·材料、仪器与试剂 | 第70-71页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第70页 |
| ·材料 | 第70-71页 |
| ·实验方法 | 第71-76页 |
| ·材料的培养和接种 | 第71-72页 |
| ·材料的培养 | 第71-72页 |
| ·菌悬液的制备 | 第72页 |
| ·接种 | 第72页 |
| ·BFB 病害严重度测定及叶组织内病原菌群体的检测 | 第72页 |
| ·GidA 表达载体的构建 | 第72-75页 |
| ·目的基因 GidA 克隆 | 第72-74页 |
| ·表达载体 pHC60-GidA 的构建 | 第74-75页 |
| ·质粒转化细菌 | 第75页 |
| ·质粒转化大肠杆菌 | 第75页 |
| ·质粒转化西瓜食酸菌 | 第75页 |
| ·细菌鞭毛观察以及细菌运动性分析 | 第75页 |
| ·生物信息学分析 | 第75-76页 |
| ·结果分析 | 第76-81页 |
| ·西瓜食酸菌中 GidA 同源蛋白的识别 | 第76-77页 |
| ·西瓜食酸菌 GidA 基因缺失突变体减弱了致病性及其在寄主组织内的增殖 | 第77页 |
| ·GidA 基因缺失突变体改变了菌的抽动运动性和游动运动性 | 第77-79页 |
| ·GidA 基因对西瓜食酸菌的致病性有贡献 | 第79-81页 |
| ·讨论 | 第81-83页 |
| ·小结 | 第83-84页 |
| 第六章 结论与创新点 | 第84-85页 |
| ·结论 | 第84页 |
| ·创新点 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-96页 |
| 附录 | 第96-99页 |
| 缩略词表 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100-102页 |
| 作者简介 | 第102页 |
