| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 缩略词 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-26页 |
| ·无细胞蛋白表达系统概述 | 第10-14页 |
| ·大肠杆菌无细胞蛋白表达系统 | 第11-12页 |
| ·兔网织红细胞系统 | 第12页 |
| ·麦胚无细胞蛋白合成系统 | 第12-14页 |
| ·无细胞表达系统研究进展 | 第14-18页 |
| ·利用麦胚无细胞蛋白合成系统合成的蛋白 | 第14页 |
| ·麦胚无细胞蛋白合成机制 | 第14-15页 |
| ·无细胞表达系统的优点 | 第15页 |
| ·无细胞表达系统中存在的问题 | 第15-17页 |
| ·无细胞蛋白表达系统的应用和发展前景 | 第17-18页 |
| ·江浙蝮蛇蛇毒激肽释放酶综述 | 第18-24页 |
| ·激肽释放酶作用机制 | 第18-21页 |
| ·激肽释放酶的应用 | 第21-22页 |
| ·蛇毒中的激肽释放酶 | 第22-24页 |
| ·研究目的及意义 | 第24-25页 |
| ·研究内容及技术路线 | 第25-26页 |
| 第二章 江浙蝮蛇蛇毒激肽释放酶表达载体的构建 | 第26-41页 |
| ·概述 | 第26页 |
| ·材料与试剂 | 第26-28页 |
| ·菌株、质粒、酶及试剂 | 第26页 |
| ·常用试剂配制 | 第26-28页 |
| ·主要仪器设备 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-34页 |
| ·江浙蝮蛇蛇毒激肽原酶全长基因的 PCR 扩增 | 第28-30页 |
| ·构建克隆质粒 pGEM-T easy/VK | 第30-32页 |
| ·DNA 序列测定与分析 | 第32页 |
| ·重组表达质粒 pCS~(2+)/VK 的构建 | 第32-34页 |
| ·结果与分析 | 第34-39页 |
| ·PCR 扩增蛇毒激肽释放酶基因 | 第34-35页 |
| ·全长基因胶回收结果 | 第35-36页 |
| ·重组质粒 pGEM-T easy/VK 的酶切鉴定 | 第36页 |
| ·蛇毒激肽释放酶全长基因测序结果分析 | 第36-38页 |
| ·重组表达质粒 pCS~(2+)/VK 的鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组表达质粒 pCS~(2+)/VK 测序结果 | 第39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| ·小结 | 第40-41页 |
| 第三章 蛇毒激肽释放酶的体外转录和翻译 | 第41-51页 |
| ·概述 | 第41页 |
| ·材料与试剂 | 第41-44页 |
| ·实验材料 | 第41-42页 |
| ·常用试剂配制 | 第42-44页 |
| ·抽提物缓冲液 | 第42页 |
| ·体外翻译所需溶液 | 第42页 |
| ·蛋白质电泳溶液 | 第42-43页 |
| ·Western blot 溶液 | 第43页 |
| ·RNA 电泳检测： | 第43-44页 |
| ·主要仪器 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-47页 |
| ·蛇毒激肽释放酶的体外转录 | 第44-45页 |
| ·麦胚抽提物的制备[92] | 第45-46页 |
| ·蛇毒激肽释放酶的体外翻译 | 第46页 |
| ·目的蛋白的 SDS-PAGE 电泳检测 | 第46-47页 |
| ·目的蛋白的 Western blot 检测 | 第47页 |
| ·结果与分析 | 第47-49页 |
| ·重组表达质粒 pCS~(2+)/VK 线性化 | 第47-48页 |
| ·蛇毒激肽释放酶的体外转录结果 | 第48-49页 |
| ·蛇毒激肽释放酶的体外翻译结果 | 第49页 |
| ·讨论与小结 | 第49-51页 |
| 第四章 麦胚无细胞蛋白合成系统的优化 | 第51-57页 |
| ·概述 | 第51页 |
| ·材料与试剂 | 第51-52页 |
| ·实验材料 | 第51页 |
| ·常用试剂配制 | 第51-52页 |
| ·主要仪器 | 第52页 |
| ·实验方法 | 第52-53页 |
| ·两种二次能源物质磷酸肌酸和丙酮酸的比较 | 第52页 |
| ·磷酸肌酸浓度的优化 | 第52页 |
| ·Cu~(2+)浓度优化 | 第52-53页 |
| ·转录翻译偶联系统的构建以及质粒浓度的优化 | 第53页 |
| ·转录翻译偶联系统反应温度的优化 | 第53页 |
| ·结果与分析 | 第53-56页 |
| ·二次能源物质磷酸肌酸和丙酮酸对蛋白产率的影响 | 第53-54页 |
| ·二次能源物质磷酸肌酸浓度对蛋白产率的影响 | 第54页 |
| ·Cu~(2+)浓度对蛋白产率的影响 | 第54-55页 |
| ·质粒浓度的优化 | 第55页 |
| ·反应温度的优化 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56-57页 |
| 第五章 重组蛇毒激肽释放酶的纯化和酶学性质研究 | 第57-63页 |
| ·概述 | 第57页 |
| ·材料与试剂 | 第57-58页 |
| ·实验材料 | 第57页 |
| ·试剂配制 | 第57-58页 |
| ·主要仪器 | 第58页 |
| ·试验方法 | 第58-60页 |
| ·重组蛇毒激肽释放酶的分离纯化 | 第58页 |
| ·重组蛇毒激肽释放酶酶活测定 | 第58-59页 |
| ·蛋白浓度测定方法 | 第59-60页 |
| ·结果与分析 | 第60-62页 |
| ·重组蛇毒激肽释放酶分离纯化结果 | 第60-61页 |
| ·重组蛇毒激肽释放酶酶学性质 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-63页 |
| 第六章 全文总结与展望 | 第63-65页 |
| ·结论 | 第63页 |
| ·展望 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-72页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |