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NF-κB在鼠疫菌毒力蛋白YopE致病过程中作用机制的研究

摘要第1-4页
ABSTRACT第4-5页
目录第5-8页
前言第8-9页
第一章 文献综述第9-19页
   ·鼠疫菌的致病机制第9-10页
   ·鼠疫菌重要的毒力因子第10-13页
   ·鼠疫菌与宿主细胞的相互作用第13-14页
     ·鼠疫菌抵抗宿主的免疫系统第13页
     ·机体对鼠疫菌的防御第13-14页
   ·NF-ΚB 信号通路第14-18页
     ·NF-κB/ IκB/IKK 组成结构及功能第14-15页
     ·NF-κB 信号通路的激活第15-16页
     ·NF-κB 的修饰第16-18页
     ·NF-κB 的生物学功能第18页
   ·本研究的主要内容与意义第18-19页
     ·本研究的主要内容第18页
     ·本研究的意义第18-19页
第二章 材料与方法第19-26页
   ·主要的仪器设备第19页
   ·实验相关溶液第19-20页
     ·细菌培养相关溶液第19页
     ·细胞培养相关溶液第19页
     ·Western-Blot 相关试剂第19页
     ·细胞裂解溶液第19页
     ·核蛋白提取相关溶液第19-20页
   ·实验材料第20-21页
     ·细胞株第20页
     ·菌株、载体第20页
     ·试剂第20-21页
   ·实验方法第21-26页
     ·常用细胞培养条件第21页
     ·细胞总蛋白的提取第21页
     ·细胞核蛋白的提取第21页
     ·免疫印迹第21页
     ·提取 RNA第21-22页
     ·RT-PCR第22页
     ·构建重组质粒第22页
     ·普通转染第22页
     ·电转第22-23页
     ·流式检测细胞周期第23页
     ·流式检测细胞凋亡第23页
     ·流式检测细胞 ROS第23页
     ·Hochest 染色第23页
     ·报告基因实验第23-24页
     ·免疫共沉淀(CO-IP)第24页
     ·GST-Pull Down第24页
     ·间接免疫(荧光共聚焦)第24页
     ·泛素化第24-25页
     ·蛋白稳定性实验第25页
     ·统计学处理第25-26页
第三章 结果与讨论第26-79页
   ·YOPE 与 P65 存在相互作用第26-28页
     ·外源 YopE 与 p65 免疫共沉淀第26-27页
     ·半内源 YopE 与 p65 免疫共沉淀第27-28页
   ·YOPE 与 P65 相互作用在可诱导表达系统中的验证第28-38页
     ·可诱导表达载体的构建第28-29页
     ·稳定和优化诱导表达条件第29-32页
     ·YopE/YopE(R144A)对 HeLa 细胞生物学功能的影响第32-36页
     ·YopE 与 p65 的相互作用第36-38页
   ·YOPE 与 P65 的相互作用结构域第38-42页
   ·YOPE 激活 NF-ΚB 通路的方式第42-47页
     ·双荧光素酶报告基因检测系统的建立第42-43页
     ·YopE 不依赖 GAP 活性激活 NF-κB 通路第43-47页
   ·YOPE 促进 P65 入核第47-50页
   ·YOPE 上调 NF-ΚB 下游靶基因表达第50-57页
   ·YOPE 激活 NF-ΚB 依赖于 P65第57-59页
   ·NF-ΚB 在 YOPE 诱导细胞凋亡中的作用第59-71页
     ·BAY 诱导 HepG2 细胞凋亡第59-60页
     ·YopE(R144A) 拮抗 BAY 诱导的细胞凋亡第60-61页
     ·YopE 促进 NF-κB 抑制的细胞凋亡第61-65页
     ·BAY 诱导 Raw264.7 细胞凋亡第65-66页
     ·Raw264.7 细胞电转条件的优化第66-68页
     ·YopE(R144A)拮抗 BAY 诱导的 Raw264.7 细胞凋亡第68页
     ·YopE 促进 NF-κB 抑制的 Raw264.7 细胞凋亡第68-71页
   ·YOPE 促进 P65 与 IΚBΑ的解离第71-74页
   ·YOPE 提高 P65 蛋白的稳定性第74-76页
   ·YOPE 与 A20 的关系第76-77页
   ·小结第77-79页
第四章 结论与展望第79-80页
   ·结论第79页
   ·展望第79-80页
参考文献第80-87页
附录第87-92页
发表论文和参加科研情况说明第92-93页
致谢第93页

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