| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-19页 |
| ·血小板第四因子(PF4)的概述 | 第9页 |
| ·PF4 的重组表达 | 第9-11页 |
| ·原核表达系统 | 第10-11页 |
| ·甲醇酵母表达系统 | 第11页 |
| ·家蚕、幼虫表达系统 | 第11页 |
| ·串联技术在小分子多肽中的应用 | 第11-13页 |
| ·多肽的分离纯化 | 第13-17页 |
| ·亲和色谱 | 第14-15页 |
| ·离子交换色谱 | 第15页 |
| ·疏水作用色谱 | 第15-16页 |
| ·凝胶过滤色谱 | 第16页 |
| ·共价色谱 | 第16页 |
| ·反相色谱 | 第16-17页 |
| ·本文研究的主要内容 | 第17-19页 |
| 第二章 血小板因子 4 基因、串联单位及第一串联单位的克隆 | 第19-39页 |
| ·实验材料 | 第19-21页 |
| ·菌种与载体 | 第19-20页 |
| ·主要实验试剂 | 第20页 |
| ·主要实验仪器 | 第20页 |
| ·引物合成 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-29页 |
| ·引物设计与合成 | 第21-22页 |
| ·PF4 基因、串联单位及第一串联单位的 PCR 扩增策略 | 第22页 |
| ·PF4 基因、串联单位及第一串联单位的扩增 | 第22-29页 |
| ·实验结果 | 第29-38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| 第三章 工程菌的构建与表达 | 第39-53页 |
| ·实验材料 | 第39-40页 |
| ·菌种和载体 | 第39-40页 |
| ·主要实验试剂 | 第40页 |
| ·主要实验仪器 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-45页 |
| ·pEASY-T1-nf PF4 (n=1, 2…6) 载体的构建 | 第40-42页 |
| ·工程菌 E. coli DH5α/pBV220-nf PF4 和 E. coli BL21(DE3)/pET28a(+)-nfPF4 (n=1, 2…6)的构建 | 第42页 |
| ·工程菌 E. coli DH5α/pBV220-nf PF4 和 E. coli BL21(DE3)/pET28a(+)-nfPF4 (n=1, 2…6)的诱导表达 | 第42-45页 |
| ·实验结果 | 第45-51页 |
| ·工程菌 E. coli DH5α/pBV220-nf PF4 和 E. coli BL21(DE3)/pET28a(+)-nfPF4 (n=1, 2…6)的构建 | 第45-46页 |
| ·工程菌 E. coli DH5α/pBV220-nf PF4 和 E. coli BL21(DE3)/pET28a(+)-nfPF4 (n=1, 2…6)的初步诱导表达 | 第46-49页 |
| ·工程菌 E. coli BL21(DE3)/pET28a(+)-nf PF4 (n=1, 2…6)表达量的比较与Western blot 检测 | 第49-50页 |
| ·工程菌 E. coli BL21(DE3)/pET28a(+)-4f PF4 表达条件的优化 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| 第四章 重组蛋白的分离纯化、鉴定和活性实验 | 第53-62页 |
| ·实验材料 | 第53-54页 |
| ·菌种和载体 | 第53页 |
| ·主要实验试剂 | 第53页 |
| ·主要实验仪器 | 第53-54页 |
| ·实验方法 | 第54-56页 |
| ·重组融合蛋白 His-PF4 的分离纯化 | 第54-55页 |
| ·重组融合蛋白 His-PF4 的鉴定 | 第55页 |
| ·活性实验 | 第55-56页 |
| ·实验结果 | 第56-61页 |
| ·重组融合蛋白 His-PF4 的分离纯化 | 第56-57页 |
| ·重组融合蛋白 His-PF4 的鉴定 | 第57-59页 |
| ·活性实验 | 第59-61页 |
| ·讨论 | 第61-62页 |
| 第五章 结论与展望 | 第62-63页 |
| ·结论 | 第62页 |
| ·展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-66页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
