哈茨木霉诱导cDNA文库的构建及表达序列标签的分析
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-16页 |
| ·课题背景 | 第10页 |
| ·国内外研究现状 | 第10-15页 |
| ·木霉菌在生物防治上的应用 | 第11页 |
| ·木霉菌的生物防治机制 | 第11-12页 |
| ·EST测序时cDNA文库的构建和参数评估 | 第12-14页 |
| ·寡糖诱导抗性机理 | 第14-15页 |
| ·本课题的来源及主要研究内容 | 第15-16页 |
| 第2章 哈茨木霉诱导菌丝体cDNA文库构建 | 第16-34页 |
| ·实验材料 | 第16-17页 |
| ·菌株和载体 | 第16页 |
| ·培养基 | 第16-17页 |
| ·试剂 | 第17页 |
| ·仪器设备 | 第17页 |
| ·实验方法 | 第17-25页 |
| ·菌种培养 | 第17页 |
| ·几丁质酶酶活力测定 | 第17-19页 |
| ·Total RNA的提取 | 第19页 |
| ·mRNA的分离 | 第19-20页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第20页 |
| ·DNA第二链的合成 | 第20-21页 |
| ·双链cDNA末端补平 | 第21页 |
| ·加接EcoR I 接头 | 第21-22页 |
| ·cDNA末端的磷酸化及Xho I酶切 | 第22页 |
| ·胶回收cDNA | 第22-23页 |
| ·cDNA和载体的连接 | 第23页 |
| ·感受态细胞制备 | 第23-24页 |
| ·连接产物纯化 | 第24页 |
| ·电转化流程 | 第24页 |
| ·文库质量鉴定 | 第24-25页 |
| ·实验结果 | 第25-31页 |
| ·几丁质酶酶活分析 | 第25-27页 |
| ·菌丝体Total RNA的提取 | 第27-28页 |
| ·mRNA的分离 | 第28页 |
| ·双链cDNA的合成与胶回收 | 第28-29页 |
| ·cDNA文库的滴定测定 | 第29页 |
| ·cDNA文库的重组率及插入片断长度的检测 | 第29-31页 |
| ·讨论 | 第31-33页 |
| ·木霉几丁质酶基因的特点 | 第31页 |
| ·RNA操作的注意事项 | 第31-32页 |
| ·cDNA 文库的代表性 | 第32-33页 |
| ·本章小结 | 第33-34页 |
| 第3章 表达序列标签的序列测定及检验 | 第34-56页 |
| ·实验材料 | 第34-35页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·培养基 | 第34页 |
| ·试剂 | 第34页 |
| ·仪器设备 | 第34-35页 |
| ·软件 | 第35页 |
| ·数据库 | 第35页 |
| ·测序方法 | 第35-40页 |
| ·模板制备 | 第35-36页 |
| ·cDNA序列测定准备 | 第36-37页 |
| ·MegaBACE测序 | 第37-39页 |
| ·信息收集与处理 | 第39页 |
| ·序列编辑 | 第39页 |
| ·序列的格式转化及库提交 | 第39页 |
| ·数据比较 | 第39-40页 |
| ·分类 | 第40页 |
| ·独立基因数据库的构建 | 第40页 |
| ·实验结果 | 第40-53页 |
| ·文库送检结果 | 第40-42页 |
| ·大规模EST序列测定结果 | 第42页 |
| ·EST在GenBank上的登录 | 第42-43页 |
| ·高质量EST序列分析 | 第43-44页 |
| ·序列的聚类分析 | 第44页 |
| ·同源性检索分析 | 第44-46页 |
| ·独立基因的丰度表达 | 第46-48页 |
| ·已知功能基因分类 | 第48页 |
| ·高丰度表达基因 | 第48-49页 |
| ·与生防相关基因的分析 | 第49-53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| ·EST序列测定结果检验 | 第53页 |
| ·生物防治作用分析 | 第53-55页 |
| ·本章小结 | 第55-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第63-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
