| 图片目录 | 第1-13页 |
| 表格目录 | 第13-14页 |
| 中文摘要 | 第14-17页 |
| 英文摘要 | 第17-21页 |
| 第一章 犁头尖凝集素(Typhonium divaricatum(L.)Decne agglutinin)的分离纯化和基本性质研究 | 第21-66页 |
| 摘要 | 第21-24页 |
| 前言 | 第24-25页 |
| 1 材料和方法 | 第25-36页 |
| 1．1 材料 | 第25-26页 |
| 1．2．方法 | 第26-36页 |
| 1．2．1 犁头尖凝集素的分离纯化 | 第26-27页 |
| 1．2．2 蛋白纯度检测 | 第27页 |
| 1．2．3 Sephacryl S-200分子筛层析测定表观分子量 | 第27页 |
| 1．2．4 等电聚焦 | 第27页 |
| 1．2．5 蛋白浓度测定 | 第27页 |
| 1．2．6 犁头尖凝集素凝血活性测定 | 第27页 |
| 1．2．7 犁头尖凝集素糖抑制实验 | 第27-28页 |
| 1．2．8 温度,pH,金属离子对蛋白活性的影响 | 第28页 |
| 1．2．9 内源荧光光谱测定 | 第28页 |
| 1．2．10 荧光淬灭 | 第28-29页 |
| 1．2．11 变性剂对TDA凝血活性的影响 | 第29-30页 |
| 1．2．12 色氨酸修饰及被修饰色氨酸残基数的测定 | 第30页 |
| 1．2．13 其他氨基酸修饰 | 第30-32页 |
| 1．2．14 TDA的抗虫活性 | 第32-33页 |
| 1．2．15 TDA对肿瘤细胞的作用(采用SRB法) | 第33页 |
| 1．2．16 TDA对单纯疱疹病毒(HSV—Ⅱ)的抑制作用(采用MTT法) | 第33-36页 |
| 2．结果 | 第36-59页 |
| 2．1 犁头尖凝集素的分离纯化 | 第36-38页 |
| 2．2 TDA纯度和分子量测定 | 第38页 |
| 2．3 等电聚焦 | 第38页 |
| 2．4 TDA的凝血活性检测和糖抑制实验结果 | 第38页 |
| 2．5 不同温度,pH和金属离子对TDA凝集活性的影响 | 第38-41页 |
| 2．6 内源荧光光谱测定 | 第41-42页 |
| 2．7 荧光淬灭 | 第42-47页 |
| 2．8 变性剂对TDA活性和荧光光谱的影响 | 第47-51页 |
| 2．9 氨基酸修饰 | 第51-55页 |
| 2．10 色氨酸修饰 | 第55-57页 |
| 2．11 抗虫活性 | 第57页 |
| 2．12 抗肿瘤活性 | 第57-58页 |
| 2．13 抗HSV-Ⅱ病毒活性 | 第58-59页 |
| 讨论 | 第59-61页 |
| 小结 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 第二章 犁头尖凝集素(Typhonium divaricatum(L.)Decne agglutinin)的基因克隆及序列分析 | 第66-106页 |
| 摘要 | 第66-67页 |
| 前言 | 第67页 |
| 1．材料和方法 | 第67-80页 |
| 1．1 材料与试剂 | 第67-68页 |
| 1．2 方法 | 第68-80页 |
| 1．2．1 犁头尖总RNA的提取 | 第68-69页 |
| 1．2．2 总DNA的提取 | 第69页 |
| 1．2．3 总RNA和DNA的定量分析 | 第69页 |
| 1．2．4 RT-PCR反应 | 第69-77页 |
| 1．2．5 PCR扩增片段的回收、连接 | 第77页 |
| 1．2．6 PCR扩增片段的转化、鉴定和测序 | 第77-78页 |
| 1．2．7 犁头尖凝集素基因组序列的获得 | 第78-79页 |
| 1．2．8 犁头尖凝集素基因序列的生物信息学分析 | 第79-80页 |
| 2 结果和分析 | 第80-102页 |
| 2．1 犁头尖总RNA及DNA的质量分析 | 第80页 |
| 2．2 犁头尖凝集素cDNA基因全长的扩增与克隆 | 第80-82页 |
| 2．3 犁头尖凝集素基因全长核苷酸序列及其分析 | 第82-83页 |
| 2．4 犁头尖凝集素推测出的氨基酸序列及其分析 | 第83-102页 |
| 2．4．1 TDA推导出的氨基酸序列 | 第83-84页 |
| 2．4．2 犁头尖凝集素(TDA)(PCLII)推测的氨基酸序列的同源性分析 | 第84-87页 |
| 2．4．3 犁头尖凝集素(TDA)信号肽的分析 | 第87页 |
| 2．4．4 TDA成熟蛋白序列的分析 | 第87-92页 |
| 2．4．5 TDA前体蛋白的跨膜区预测 | 第92-93页 |
| 2．4．6 蛋白的修饰位点预测 | 第93-94页 |
| 2．4．7 蛋白的二级结构预测 | 第94-96页 |
| 2．4．8 TDA蛋白的三维结构预测 | 第96-98页 |
| 2．4．9 TDA成熟蛋白序列中结构域的预测与分析 | 第98页 |
| 2．4．10 TDA和其他单子叶甘露糖结合凝集素的进化关系 | 第98-101页 |
| 2．4．11 TDA基因与大肠杆菌密码子使用频率的比较 | 第101-102页 |
| 讨论 | 第102-103页 |
| 小结 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-106页 |
| 第三章 犁头尖凝集素(Typhonium divaricatum(L.)Decne agglutinin)基因在大肠杆菌中的表达 | 第106-123页 |
| 摘要 | 第106-107页 |
| 前言 | 第107页 |
| 1．材料和方法 | 第107-115页 |
| 1．1 实验材料 | 第107-109页 |
| 1．2 方法 | 第109-115页 |
| 1．2．1 犁头尖凝集素(TFA)基因片段的制备 | 第110页 |
| 1．2．2 表达载体的制备 | 第110页 |
| 1．2．3 大肠杆菌Top10、M15感受态细胞的制备 | 第110页 |
| 1．2．4 表达片断的酶切、连接及克隆 | 第110-111页 |
| 1．2．5 表达产物菌落Western检测 | 第111-112页 |
| 1．2．6 转化子的鉴定 | 第112页 |
| 1．2．7 犁头尖凝集素(TDA)的诱导表达和SDS-PAGE分析 | 第112-113页 |
| 1．2．8 表达条件的优化 | 第113页 |
| 1．2．9 表达产物可溶性检测 | 第113-114页 |
| 1．2．10 表达产物的纯化 | 第114页 |
| 1．2．11 表达产物的活性检测 | 第114-115页 |
| 2 结果与分析 | 第115-122页 |
| 2．1 犁头尖凝集素(TDA)基因片段的克隆与表达载体的构建 | 第115页 |
| 2．2 重组表达质粒的筛选和检测 | 第115-117页 |
| 2．3 犁头尖凝集素(TDA)表达产物的SDS-PAGE检测 | 第117-118页 |
| 2．4 犁头尖凝集素(TDA)表达条件的优化 | 第118-120页 |
| 2．5 表达产物可溶性检测 | 第120-121页 |
| 2．6 犁头尖凝集素(TDA)基因表达产物的纯化 | 第121页 |
| 2．7 犁头尖凝集素(TDA)纯化蛋白的活性检测 | 第121-122页 |
| 小结 | 第122-123页 |
| 第四章 犁头尖凝集素(Typhonium divaricatum(L.) Decne agglutinin)基因转化烟草及其在转基因烟草中的表达 | 第123-153页 |
| 摘要 | 第123-124页 |
| 前言 | 第124-126页 |
| 1．材料与方法 | 第126-140页 |
| 1．1 实验材料 | 第126-128页 |
| 1．2 方法 | 第128-140页 |
| 1．2．1 犁头尖总RNA的提取 | 第128页 |
| 1．2．2 犁头尖凝集素基因(TDA)的制备 | 第128-130页 |
| 1．2．3 pBI121载体的构建 | 第130-132页 |
| 1．2．4 载体对农杆菌的转化及鉴定 | 第132-133页 |
| 1．2．5 农杆菌介导的烟草的转化 | 第133-134页 |
| 1．2．6 转基因烟草苗的获得及形态观察 | 第134页 |
| 1．2．7 转基因植株的检测 | 第134-138页 |
| 1．2．8 凝血活性的测定 | 第138页 |
| 1．2．9 抗虫活性的检测 | 第138-139页 |
| 1．2．10 转基因子代的组织培养和检测 | 第139-140页 |
| 2 结果与分析 | 第140-148页 |
| 2．1 犁头尖凝集素(TDA)基因的扩增 | 第140页 |
| 2．2 表达载体的构建 | 第140-143页 |
| 2．2．1 表达载体pBI121的制备 | 第140页 |
| 2．2．2 目的片段的制备 | 第140页 |
| 2．2．3 表达载体的连接与转化 | 第140-141页 |
| 2．2．4 表达载体的鉴定 | 第141-142页 |
| 2．2．5 农杆菌中重组质粒的鉴定 | 第142-143页 |
| 2．3 Kan抗性植株的分化与形态观察 | 第143-145页 |
| 2．4 转基因植株的鉴定 | 第145页 |
| 2．4．1 PCR检测 | 第145页 |
| 2．4．2 Southern杂交检测 | 第145页 |
| 2．4．3 反转录聚合链式扩增检测 | 第145页 |
| 2．5 凝血活性检测 | 第145-147页 |
| 2．6 抗虫活性的检测 | 第147-148页 |
| 2．7 转基因子代的组培和检测 | 第148页 |
| 讨论 | 第148-150页 |
| 小结 | 第150页 |
| 参考文献 | 第150-153页 |
| 文献综述：凝集素的研究进展 | 第153-191页 |
| 前言 | 第153页 |
| 1 凝集素的分类 | 第153-159页 |
| 1．1 植物凝集素 | 第154-156页 |
| 1．2 动物凝集素 | 第156-157页 |
| 1．3 微生物凝集素 | 第157-159页 |
| 2 凝集素的结构 | 第159-160页 |
| 3 凝集素的性质 | 第160-161页 |
| 3．1 凝集素的基本特性 | 第160页 |
| 3．2 植物凝集素的生物学特性 | 第160-161页 |
| 3．3 动物凝集素的生物学特性 | 第161页 |
| 4 凝集素的功能 | 第161-168页 |
| 4．1 防御功能 | 第162-163页 |
| 4．2 鉴定功能 | 第163-165页 |
| 4．3 对肿瘤的诊断 | 第165-167页 |
| 4．4 对肝、胆、胰疾病的诊断 | 第167-168页 |
| 5 凝集素的应用 | 第168-171页 |
| 5．1 在肿瘤治疗中的应用 | 第168-170页 |
| 5．2 在肿瘤预后的应用 | 第170-171页 |
| 5．3 凝集素在抗病毒、抗菌药物设计上的应用 | 第171页 |
| 6 重组植物凝集素研究其结构与功能 | 第171-182页 |
| 6．1 克隆与表达 | 第171-177页 |
| 6．2 突变 | 第177-180页 |
| 6．3 应用结构功能研究 | 第180-182页 |
| 7 展望 | 第182页 |
| 参考文献 | 第182-191页 |
| 在读期间发表和待发表论文及获奖情况 | 第191-193页 |
| 致谢 | 第193-194页 |
