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白菜细胞核雄性不育相关基因mf-CYP450的分子鉴定、克隆和序列分析

缩略词表第1-10页
中文摘要第10-12页
0 引言第12-80页
 1 文献综述第14-30页
  1.1 植物核雄性不育研究概况第14-19页
   1.1.1 植物核雄性不育的生理生化研究第15页
   1.1.2 植物核雄性不育发生的细胞学研究第15-17页
    1.1.2.1 四分体以前发生败育的GMS第15-16页
    1.1.2.2 四分体后发生败育的GMS第16-17页
    1.1.2.3 绒毡层异常与小孢子败育第17页
   1.1.3 植物核雄性不育分子机理的研究第17-19页
  1.2 mRNA差别显示技术及其研究概况第19-23页
   1.2.1 mRNA差别显示技术原理第20页
   1.2.2 mRNA差别显示技术第20-22页
   1.2.3 mRNA差别显示技术在植物研究上的应用第22-23页
    1.2.3.1 生物体对外界刺激反应的研究第22页
    1.2.3.2 杂种优势机理的研究第22-23页
    1.2.3.3 植物发育机理的研究第23页
  1.3 RACE方法及其研究进展第23-27页
   1.3.1 RACE原理第24页
   1.3.2 传统RACE的改良第24-26页
    1.3.2.1 简并引物的使用第24-25页
    1.3.2.2 随机引物的使用第25-26页
    1.3.2.3 任意引物的使用第26页
    1.3.2.4 以cDNA第一链为模板的PCR技术的改进第26页
     1.3.2.4.1 嗜热逆转录酶的使用第26页
     1.3.2.4.2 DNA聚合酶精确性的提高第26页
     1.3.2.4.3 反应特异性的提高第26页
   1.3.3 新型RACE第26-27页
    1.3.3.1 RNA连接酶介导的RACE第26-27页
    1.3.3.2 Oligo-capping方法第27页
  1.4 RAPD分子标记及其应用基础第27-30页
 2 白菜细胞核雄性不育两用系的性状比较分析第30-36页
  2.1 材料与方法第30-31页
   2.1.1 试验材料第30页
   2.1.2 植株形状观察与育性鉴定第30页
   2.1.3 花粉扫描电镜第30-31页
   2.1.4 花器形态比较观察第31页
   2.1.5 花蕾总蛋白的SDS-PAGE电泳第31页
  2.2 结果与分析第31-34页
   2.2.1 植株形状和花器形态的比较第31-34页
   2.2.2 花粉生活力的检测及育性鉴定第34页
   2.2.3 花蕾总蛋白的SDS-PAGE电泳第34页
  2.3 讨论第34-36页
 3 白菜细胞核雄性不育两用系小孢子发生的细胞学形态观察第36-42页
  3.1 材料与方法第36页
  3.2 结果与分析第36-40页
   3.2.1 两用系可育株的小孢子发育过程第36-37页
   3.2.2 两用系不育株的小孢子发育过程第37-40页
  3.3 讨论第40-42页
   3.2.1 两用系不育株小孢子败育发生时期第40页
   3.3.2 两用系不育株小孢子发育过程中异常现象第40-42页
 4 白菜细胞核雄性不育基因的RAPD标记及遗传分析第42-53页
  4.1 材料与方法第42-44页
   4.1.1 材料第42页
   4.1.2 白菜总DNA的提取与检测第42-43页
   4.1.3 RAPD扩增第43-44页
   4.1.4 玻璃奶(glassmilk)法回收特异DNA片断第44-47页
   4.1.5 RAPD标记的克隆和测序第47-44页
  4.2 结果与分析第44-50页
   4.2.1 白菜总DNA的提取与检测第44-46页
   4.2.2 不同复性温度的比较第46页
   4.2.3 随机引物的筛选第46页
   4.2.4 S107-B RAPD标记的单株遗传验证第46页
   4.2.5 S107-B片断的克隆与分析第46-50页
  4.3 讨论第50-53页
   4.3.1 白菜基因组DNA提取中的纯化、降解与产率问题第50页
   4.3.2 RAPD-PCR条件的优化第50-51页
   4.3.3 RAPD-PCR反应可重复性问题第51页
   4.3.4 RAPD随机引物的筛选第51页
   4.3.5 S107-B RAPD标记的单株遗传验证及遗传分析第51-53页
 5 白菜细胞核雄性不育两用系花蕾的mRNA差别显示及其差异片断的分析第53-66页
  5.1 材料与方法第53-57页
   5.1.1 研究材料第53页
   5.1.2 三种锚定引物及随机引物第53页
   5.1.3 RNA提取与检测第53-54页
   5.1.4 cDNA第一链合成第54页
   5.1.5 cDNA第一链合成的PCR扩增第54页
   5.1.6 PCR扩增产物电泳、银染及回收第54-55页
   5.1.7 cDNA差异片断Northern印迹分析第55-56页
   5.1.8 经Northern杂交验证的cDNA差异片断的克隆、测序第56-57页
  5.2 结果与分析第57-64页
   5.2.1 RNA的提取与检测第57-58页
   5.2.2 cDNA第一链合成第58页
   5.2.3 mRNA差别显示和cDNA差异片断的获得第58-61页
   5.2.4 cDNA差异片断的分析第61-64页
    5.2.4.1 cDNA差异片断的Northern验证第61页
    5.2.4.2 B0302-4 cDNA差异片断的克隆与鉴定第61-63页
    5.2.4.3 B0302-4差异片断序列测定第63-64页
  5.3 讨论第64-66页
 6 含B0302-4差异片断全长基因mf-CYP450基因的获得及其序列分析第66-80页
  6.1 材料与方法第66-68页
   6.1.1 花蕾总RNA第66页
   6.1.2 各种生化试剂第66页
   6.1.3 B0302-4片断的3’RACE第66-67页
   6.1.4 B0302-4片断的5’RACE第67-68页
   6.1.5 差异cDNA片断B0302-4的5’端序列扩增第68页
   6.1.6 PCR产物回收、回收产物的连接与克隆及序列分析第68页
  6.2 结果与分析第68-76页
   6.2.1 B0302-4片断的3’RACE及序列分析第68-70页
   6.2.2 B0302-4片断的5’RACE第70页
   6.2.3 B0302-4片断的5’PCR扩增第70-71页
   6.2.4 mf-CYP450基因的序列分析第71-76页
  6.3 讨论第76-80页
   6.3.1 mf-CYP450基因的功能验证第76-77页
   6.3.2 细胞色素P450在植物生长发育中的作用第77-78页
   6.3.3 mf-CYP450基因与白菜的核雄性不育第78-80页
参考文献第80-88页
英文摘要第88-91页
作者简介第91页

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