| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-10页 |
| 1 绪论 | 第10-25页 |
| ·立题依据 | 第10-11页 |
| ·国内外研究现状 | 第11-21页 |
| ·研究目的 | 第21-22页 |
| ·研究内容和技术路线 | 第22-24页 |
| ·本研究的创新点 | 第24-25页 |
| 2 材料和方法 | 第25-36页 |
| ·供试菌株与昆虫 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| ·主要试剂 | 第26-28页 |
| ·桑粒肩天牛幼虫肠道微生物传统的分离、纯化、鉴定 | 第28页 |
| ·肠道微生物样品制备 | 第28页 |
| ·肠道微生物的分离、纯化 | 第28页 |
| ·生理生化测试鉴定 | 第28页 |
| ·分子生物学方法研究桑粒肩天牛幼虫肠道微生物群落 | 第28-33页 |
| ·PCR 模板制备 | 第28-29页 |
| ·PCR 扩增反应体系及反应程序 | 第29-31页 |
| ·扩增片段的检测及变性聚丙烯酰胺凝胶分离 | 第31页 |
| ·分离片段的克隆、测序与分析 | 第31-33页 |
| ·重组质粒构建 | 第33-35页 |
| ·供试菌株 | 第33页 |
| ·苏云金芽胞杆菌质粒的提取(碱法小量提取) | 第33页 |
| ·特异引物设计与Cry3A 基因的PCR 扩增 | 第33-34页 |
| ·GFP 标记基因与Cry3A 基因的连接 | 第34-35页 |
| ·转基因工程菌的构建与表达检测 | 第35-36页 |
| ·转基因工程菌的构建 | 第35页 |
| ·重组基因表达检测 | 第35-36页 |
| 3 结果 | 第36-48页 |
| ·桑天牛幼虫肠道可培养微生物 | 第36-37页 |
| ·桑天牛幼虫肠道可培养菌群的种类和菌量. | 第36页 |
| ·桑天牛幼虫肠道的优势菌群 | 第36-37页 |
| ·桑粒肩天牛幼虫肠道优势菌群分子生物学方法验证 | 第37-40页 |
| ·肠道微生物16S rDNA 片段的扩增获得 | 第37-38页 |
| ·不同菌群16S rDNA 片段的聚丙稀酰胺凝胶电泳分离 | 第38页 |
| ·肠道菌群的16S rDNA 片段测序与分析 | 第38-40页 |
| ·杀虫晶体毒蛋白基因的提取 | 第40-42页 |
| ·苏云金芽胞杆菌质粒的提取 | 第40页 |
| ·优化的PCR 扩增杀虫晶体毒蛋白基因(Cry3A 基因)反应体系和反应程序 | 第40-41页 |
| ·杀虫晶体毒蛋白基因(Cry3A 基因)的获得 | 第41-42页 |
| ·含GFP 标记基因的Cry3A 基因重组质粒载体的构建 | 第42-46页 |
| ·含GFP 标记基因的PDHG5.2 质粒的提取 | 第42-43页 |
| ·Cry3A-GFP 重组基因片段的获得 | 第43-44页 |
| ·将Cry3A-GFP 基因片段插入3105 质粒载体 | 第44-45页 |
| ·重组质粒载体的检测 | 第45-46页 |
| ·含Cry3A-GFP 基因片段的重组质粒载体的荧光表达检测 | 第46页 |
| ·携带Cry 基因的3105 质粒和827-304 质粒在肠杆菌和葡萄球菌中的表达 | 第46-48页 |
| 4 讨论 | 第48-53页 |
| ·桑粒肩天牛幼虫肠道的优势菌群 | 第48页 |
| ·不同生长环境、不同季节对桑粒肩天牛幼虫肠道菌群的影响 | 第48-49页 |
| ·传统分离、纯化、鉴定方法是16S rRNA 序列分析微生物多样性不可或缺的补充 | 第49-50页 |
| ·应用16S rRNA 序列分析法研究昆虫肠道微生物对模板制备的要求 | 第50-52页 |
| ·重组质粒载体转化子的表达分析 | 第52-53页 |
| 5 结论与展望 | 第53-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 附录: | 第61-62页 |
| 1. 作者在攻读硕士学位期间参加的科研项目 | 第61页 |
| 2. 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第61-62页 |
| 独创性声明 | 第62页 |
| 学位论文版权使用授权书 | 第62页 |
