枯草芽胞杆菌lipA基因启动子的修饰及其表达
| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-21页 |
| ·微生物脂肪酶的应用和生产 | 第8-11页 |
| ·微生物脂肪酶 | 第8页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第8-10页 |
| ·脂肪酶的生产 | 第10-11页 |
| ·微生物脂肪酶的结构和酶学性质 | 第11-14页 |
| ·脂肪酶的结构特征 | 第11-12页 |
| ·pH和温度对脂肪酶活性的影响 | 第12页 |
| ·脂肪酶的底物特异性 | 第12-13页 |
| ·位置特异性 | 第12-13页 |
| ·脂肪酸特异性 | 第13页 |
| ·立体异构特异性 | 第13页 |
| ·脂肪酶在有机溶剂中的稳定性 | 第13页 |
| ·金属离子对脂肪酶活性的影响 | 第13-14页 |
| ·枯草芽胞杆菌的脂肪酶 | 第14-16页 |
| ·枯草芽胞杆菌 | 第14页 |
| ·枯草芽胞杆菌的纯脂肪酶 | 第14-15页 |
| ·脂肪酶的编码基因lipA | 第15页 |
| ·LipA分泌的Sec途径 | 第15-16页 |
| ·枯草芽胞杆菌脂肪酶的过量表达 | 第16-17页 |
| ·枯草芽孢杆菌基因表达元件的研究进展 | 第17-19页 |
| ·σ因子 | 第17页 |
| ·启动子 | 第17-18页 |
| ·核糖体结合位点SD序列 | 第18-19页 |
| ·终止信号 | 第19页 |
| ·本文的研究内容和目的 | 第19-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-33页 |
| ·实验材料 | 第21-25页 |
| ·菌株和质粒 | 第21页 |
| ·主要药品 | 第21-22页 |
| ·主要试剂 | 第22-23页 |
| ·培养基 | 第23-24页 |
| ·主要仪器 | 第24-25页 |
| ·PCR和重叠PCR扩增的引物 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-33页 |
| ·B. subtilis染色体DNA提取 | 第25页 |
| ·质粒的小规模提取 | 第25-26页 |
| ·普通PCR扩增 | 第26-27页 |
| ·重叠PCR扩增 | 第27-28页 |
| ·酚抽提和乙醇沉淀 | 第28-29页 |
| ·DNA片段的回收纯化 | 第29页 |
| ·DNA的酶切 | 第29页 |
| ·DNA连接反应 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第30页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第30页 |
| ·B.subtilis Spizizen转化 | 第30-31页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第31页 |
| ·脂肪酶活力的测定 | 第31-33页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第33-50页 |
| ·lipA基因表达元件的分析 | 第33-38页 |
| ·lipA基因启动子分析 | 第33-35页 |
| ·lipA基因SD序列分析 | 第35-36页 |
| ·lipA基因终止子的分析 | 第36页 |
| ·LipA信号肽序列分析 | 第36-38页 |
| ·lipA基因表达元件的修饰方案 | 第38页 |
| ·构建重组质粒pUC18-L | 第38-41页 |
| ·PCR扩增L片段 | 第39-40页 |
| ·质粒pUC18 的提取及验证 | 第40页 |
| ·pUC18-L的连接、转化及筛选 | 第40-41页 |
| ·重组质粒pUC18-Le的构建 | 第41-43页 |
| ·PCR扩增e片段 | 第41-42页 |
| ·酶切、连接、转化及转化子验证 | 第42-43页 |
| ·脂肪酶缺陷菌株的构建 | 第43-44页 |
| ·转化和转化子筛选 | 第43页 |
| ·转化子验证 | 第43-44页 |
| ·构建重组质粒pUC18-Ln | 第44-47页 |
| ·Ln片段的重叠PCR扩增 | 第45-46页 |
| ·构建重组质粒pUC18-Ln | 第46页 |
| ·转化子的验证 | 第46-47页 |
| ·lipA基因启动子的修饰 | 第47-49页 |
| ·质粒pUC18-Ln的转化和转化子筛选 | 第47-48页 |
| ·转化子验证 | 第48-49页 |
| ·B. subtilis SH-2 的摇瓶发酵 | 第49-50页 |
| 第四章 结论与展望 | 第50-51页 |
| ·主要结论 | 第50页 |
| ·展望 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
