| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 绪论 | 第9-16页 |
| ·课题背景 | 第9页 |
| ·SLP76概述 | 第9-10页 |
| ·SLP76的结构分析 | 第10-13页 |
| ·SAM结构域 | 第10页 |
| ·SH2结构域 | 第10-12页 |
| ·富含脯氨酸的结构域 | 第12页 |
| ·SLP76的各磷酸化位点 | 第12-13页 |
| ·SLP76参与的信号转导 | 第13页 |
| ·AGEs-RAGE系统与糖尿病及其相关病症 | 第13-14页 |
| ·研究的目的与意义 | 第14-15页 |
| ·技术路线 | 第15-16页 |
| 2 SLP76突变体的构建及AGEs的制备 | 第16-28页 |
| ·试验材料 | 第16-17页 |
| ·菌株 | 第16页 |
| ·试验主要试剂来源 | 第16页 |
| ·试验主要药品的配制 | 第16页 |
| ·仪器设备 | 第16-17页 |
| ·实验方法 | 第17-23页 |
| ·SLP76富含脯氨酸结构域的预测 | 第17页 |
| ·SLP76十种突变质粒的构建 | 第17-22页 |
| ·AGES的制备 | 第22页 |
| ·Bradford法蛋白定量 | 第22-23页 |
| ·结果与分析 | 第23-26页 |
| ·SLP76富含脯氨酸结构域的预测 | 第23页 |
| ·SLP76突变体的PCR扩增结果 | 第23-24页 |
| ·SLP76突变体的测序结果 | 第24-26页 |
| ·本章小结 | 第26-28页 |
| ·结论 | 第26页 |
| ·讨论 | 第26-28页 |
| 3 SLP76各结构域及磷酸化位点的功能研究 | 第28-40页 |
| ·实验材料 | 第28-30页 |
| ·细胞系 | 第28页 |
| ·试验主要试剂来源 | 第28页 |
| ·试验主要药品的配制 | 第28-29页 |
| ·仪器设备 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-33页 |
| ·细胞培养及脂质体瞬时转染 | 第30页 |
| ·HA-RAGE和Flag-SLP76及SLP76突变体在HEK293细胞的表达 | 第30-31页 |
| ·AGEs刺激下SLP76及其突变体对下游MAPK的影响 | 第31页 |
| ·M2 beads操作步骤 | 第31-32页 |
| ·AGEs刺激下SLP76突变体对酪氨酸磷酸化的影响 | 第32页 |
| ·HA beads操作步骤 | 第32-33页 |
| ·AGEs刺激下SLP76突变体对与RAGE相互作用的影响 | 第33页 |
| ·结果与分析 | 第33-39页 |
| ·SLP76突变体在HEK293细胞中的瞬时表达 | 第33页 |
| ·SLP76突变体对MAPK磷酸化的影响 | 第33-36页 |
| ·SLP76突变体对SLP76酪氨酸磷酸化的影响 | 第36-37页 |
| ·SLP76突变体对RAGE-SLP76相互作用的影响 | 第37-39页 |
| ·本章小结 | 第39-40页 |
| ·结论 | 第39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| 结论与讨论 | 第40-43页 |
| 参考文献 | 第43-46页 |
| 附录 | 第46-48页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
