| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 英文缩略语 | 第12-14页 |
| 第一章 研究背景介绍 | 第14-44页 |
| ·microRNA 的研究背景 | 第14-24页 |
| ·microRNA 的发现以及生成过程研究 | 第14-18页 |
| ·microRNA 功能性的研究方法 | 第18-24页 |
| ·脊椎动物骨骼发育的研究背景 | 第24-39页 |
| ·脊椎动物骨骼元件发育过程 | 第24-27页 |
| ·脊椎动物滑膜关节的发育模型 | 第27-29页 |
| ·脊椎动物骨骼发育过程中主要转录因子以及信号通路 | 第29-37页 |
| ·脊椎动物骨关节炎病理发生的分子机理 | 第37-39页 |
| ·脊椎动物骨骼发育中microRNA 的研究 | 第39-44页 |
| ·成熟microRNA 对于骨骼正常发育是必须的 | 第39-41页 |
| ·软骨生成过程中以及骨关节炎病理发生中功能性microRNA 的筛选研究 | 第41-42页 |
| ·miR-140 在软骨发生过程以及关节病理发生过程发挥了重要作用 | 第42-44页 |
| 第二章 实验方法 | 第44-72页 |
| ·分子生物学实验方法 | 第44-52页 |
| ·质粒提取方法 | 第44页 |
| ·感受态制备与转化 | 第44页 |
| ·限制性内切酶反应与连接反应 | 第44页 |
| ·特定位点点突变方法 | 第44-45页 |
| ·组织RNA 提取以及反转录 | 第45页 |
| ·定量PCR | 第45页 |
| ·蛋白质提取方法 | 第45-46页 |
| ·Western Blot 实验 | 第46页 |
| ·microRNA 芯片分析 | 第46页 |
| ·成熟microRNA 定量分析 | 第46-47页 |
| ·快速cDNA 末端克隆（RACE）实验 | 第47-49页 |
| ·染色质免疫沉淀(ChIP)实验 | 第49-52页 |
| ·免疫共沉淀（Co-IP）实验 | 第52页 |
| ·细胞生物学实验方法 | 第52-60页 |
| ·细胞系培养 | 第52-53页 |
| ·L-Wnt3a 细胞蛋白收集 | 第53页 |
| ·细胞聚集（Micromass）培养实验 | 第53-55页 |
| ·细胞转染实验 | 第55页 |
| ·荧光素酶定量实验 | 第55页 |
| ·细胞原位杂交 | 第55-57页 |
| ·细胞BrdU 实验 | 第57页 |
| ·细胞增殖实验 | 第57-58页 |
| ·细胞周期测定 | 第58页 |
| ·RCAS 病毒制备 | 第58-60页 |
| ·胚胎学实验方法 | 第60-64页 |
| ·整体原位杂交 | 第60-64页 |
| ·试验材料 | 第64-72页 |
| ·化学物品以及生物学物品 | 第64-67页 |
| ·实验中涉及的引物序列 | 第67-70页 |
| ·实验中质粒信息 | 第70-72页 |
| 第三章 实验结果 | 第72-108页 |
| ·软骨化过程与Wnt 信号诱导的非软骨化过程的差异化对比芯片分析 | 第72-79页 |
| ·原代肢芽细胞进行软骨化培养以及Wnt 信号刺激下的非软骨化现象 | 第72-74页 |
| ·软骨化过程与Wnt 信号诱导的非软骨化过程的microRNA 芯片对比分析 | 第74-77页 |
| ·miR-140，miR-140*，miR-455 在软骨发生过程中特异表达 | 第77-79页 |
| ·初始miR-140/140*在软骨中与蛋白编码基因Wwp2-C 转录本特异共表达 | 第79-87页 |
| ·miR-140/140* 初始转录本与Wwp2 部分转录本在软骨发育过程中共表达 | 第79-86页 |
| ·Wwp2-C 转录本在软骨发育过程中具有蛋白编码能力 | 第86-87页 |
| ·转录因子Sox9 直接诱导miR-140/140*的表达 | 第87-91页 |
| ·转录因子Sox9 对miR-140/140*初始转录本表达具有激活作用 | 第87-89页 |
| ·转录因子Sox9 对miR-140/140*初始转录本表达激活是通过直接作用的 | 第89-90页 |
| ·Wnt 信号对Sox9 的抑制作用负调控miR-140/140*的表达 | 第90-91页 |
| ·miR-140 的下调使软骨细胞不能够维持增殖状态 | 第91-97页 |
| ·miR-140 过表达以及功能抑制性载体构建 | 第91-93页 |
| ·miR-140 功能性抑制阻碍了细胞的增殖 | 第93-97页 |
| ·Sp1 是miR-140 的一个直接靶基因 | 第97-103页 |
| ·Smad3 不是miR-140 在软骨化过程中的一个靶基因 | 第98-99页 |
| ·Sp1 是miR-140 在软骨生成过程中的一个靶基因 | 第99-103页 |
| ·Wwp2-C 蛋白在骨骼发育过程中的功能性初步分析 | 第103-108页 |
| 第四章 讨论 | 第108-116页 |
| ·miR-140，miR-140*，miR-455 在软骨发生中特异表达，肌肉相关microRNA 受到 Wnt 信号诱导激活 | 第108-110页 |
| ·miR-140 在软骨发育过程中受到Sox9 激活调控了软骨细胞的增殖过程 | 第110-112页 |
| ·受到Sox9 激活的miR-140 与宿主基因Wwp2-C 共表达 | 第112-113页 |
| ·Wwp2-C 蛋白在骨骼发育过程中的功能 | 第113-116页 |
| 第五章 总结与展望 | 第116-118页 |
| 参考文献 | 第118-132页 |
| 致谢 | 第132-134页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第134-136页 |
