| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-16页 |
| ·人胰高血糖素样肽-1(GLP-1)概况 | 第8-9页 |
| ·人胰高血糖素样肽-1(GLP-1) | 第8页 |
| ·GLP-1 的生物学作用及临床作用 | 第8页 |
| ·GLP-1 长效类似物的研究进展 | 第8-9页 |
| ·人血清白蛋白的融合技术 | 第9-10页 |
| ·人血清白蛋白 | 第9页 |
| ·白蛋白融合技术 | 第9-10页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第10-12页 |
| ·毕赤酵母（Pichia pastoris） | 第10页 |
| ·毕赤酵母宿主菌及表达载体 | 第10-11页 |
| ·毕赤酵母表达系统对外源蛋白表达的影响 | 第11-12页 |
| ·毕赤酵母高密度发酵 | 第12-13页 |
| ·高密度发酵 | 第12页 |
| ·毕赤酵母补料分批发酵 | 第12-13页 |
| ·重组蛋白的分离纯化 | 第13-14页 |
| ·重组蛋白质的特性分离方法的选择 | 第13-14页 |
| ·重组蛋白分离纯化的特点 | 第14页 |
| ·本课题研究的意义和内容 | 第14-16页 |
| ·本课题研究的意义 | 第14-15页 |
| ·本课题的研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 不同宿主及基因剂量对融合蛋白GGH 表达的影响 | 第16-26页 |
| ·引言 | 第16页 |
| ·材料与方法 | 第16-22页 |
| ·材料 | 第16-19页 |
| ·方法 | 第19-22页 |
| ·结果与分析 | 第22-25页 |
| ·重组质粒pPIC9K/GGH 的提取及其线性化 | 第22页 |
| ·融合基因GGH 在不同毕赤酵母表型中的表达及筛选 | 第22-23页 |
| ·高、中、低产菌株的发酵动力学参数比较 | 第23页 |
| ·荧光定量 PCR 确定高(GS115/F_2)、中(GS115/W_8)、低(GS115/I_2)产菌株拷贝数的差异 | 第23-24页 |
| ·Q-PCR 曲线和熔解度曲线 | 第24-25页 |
| ·本章小节 | 第25-26页 |
| 第三章 诱导条件对高产重组子GS115/GGH表达的影响 | 第26-38页 |
| ·引言 | 第26页 |
| ·材料与方法 | 第26-29页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·主要仪器 | 第27页 |
| ·培养方法 | 第27-28页 |
| ·分析方法 | 第28-29页 |
| ·结果与讨论 | 第29-36页 |
| ·种子生长曲线 | 第29-30页 |
| ·5L 罐中无机氮源培养基与有机氮源培养基发酵过程分析 | 第30-31页 |
| ·不同的甲醇流加方式对GGH 表达量的影响 | 第31-32页 |
| ·不同的甲醇诱导浓度对GGH 表达量的影响 | 第32-34页 |
| ·不同的温度对GGH 表达量的影响 | 第34-35页 |
| ·优化条件下的 5 L 发酵罐表达 GGH | 第35-36页 |
| ·本章小结 | 第36-38页 |
| 第四章 融合蛋白GGH 的分离纯化 | 第38-47页 |
| ·引言 | 第38页 |
| ·材料与方法 | 第38-40页 |
| ·材料与试剂 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38-39页 |
| ·分离纯化方法 | 第39-40页 |
| ·纯度检测方法 | 第40页 |
| ·结果与讨论 | 第40-45页 |
| ·融合蛋白GGH 的超滤浓缩过程 | 第40-41页 |
| ·Blue Sepharose 层析 | 第41-42页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第42页 |
| ·融合蛋白GGH 的离子交换过程 | 第42-44页 |
| ·融合蛋白GGH 的脱盐 | 第44页 |
| ·融合蛋白GGH 纯化工艺总结 | 第44页 |
| ·融合蛋白GGH 的纯度鉴定 | 第44-45页 |
| ·本章小结 | 第45-47页 |
| 结论与展望 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第53页 |
