| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-10页 |
| 1 前言 | 第10-23页 |
| ·橡胶炭疽病与炭疽病菌 | 第10-11页 |
| ·炭疽菌侵染策略 | 第11-12页 |
| ·胶孢炭疽菌的潜伏侵染 | 第12页 |
| ·炭疽病致病相关基因的研究 | 第12-14页 |
| ·获得T-DNA侧翼序列的研究方法 | 第14-21页 |
| ·质拉拯救(plasmid rescue)法 | 第14-15页 |
| ·反向PCR(inverse or inverted PCR,IPCR)法 | 第15-16页 |
| ·PCR-walking | 第16页 |
| ·Sequence-based分离法 | 第16-17页 |
| ·突变位点扩增法(Amplification ofinsertion mutagenised sites,AIMS) | 第17页 |
| ·连接介导PCR(Ligation-mediated PCR,LMPCR) | 第17-18页 |
| ·外源接头PCR | 第18-19页 |
| ·热不对称文错PCR(Thermal Asymmetric Interlaced PCR,TAIL-PCR) | 第19-21页 |
| ·本研究的目的意义和研究内容 | 第21-23页 |
| ·目的意义 | 第21-22页 |
| ·本研究的技术路线 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-37页 |
| ·实验材料 | 第23-25页 |
| ·胶胞炭疽菌 | 第23页 |
| ·接种材料 | 第23页 |
| ·菌种和质粒 | 第23-24页 |
| ·主要酶和生化试剂 | 第24页 |
| ·引物合成 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·滤纸片 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-37页 |
| ·致病相关突变体的筛选 | 第25-27页 |
| ·突变体的分子检测 | 第27-29页 |
| ·胶胞炭疽菌基因组DNA的提取及检测 | 第27-28页 |
| ·质粒提取及检测 | 第28-29页 |
| ·T-DNA插入的分子检测 | 第29页 |
| ·突变体的生物学表型观察 | 第29-30页 |
| ·菌落生长速率测定 | 第29页 |
| ·产孢量测定及孢子形态观察 | 第29-30页 |
| ·孢子萌发和附着胞形成的观察 | 第30页 |
| ·侵染钉形成的观察 | 第30页 |
| ·致病相关突变体T-DNA插入位点的侧翼序列分析 | 第30-37页 |
| ·TAIL-PCR扩增 | 第30-34页 |
| ·TAIL-PCR扩增产物回收 | 第34页 |
| ·TAIL-PCR产物和载体的连接 | 第34页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 | 第34-35页 |
| ·菌液PCR鉴定 | 第35-36页 |
| ·TALI-PCR产物的测序和分析 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-50页 |
| ·T-DNA插入突变转化效率 | 第37页 |
| ·致病力相关突变体筛选结果与分析 | 第37-40页 |
| ·离体叶片接种发病情况 | 第37-38页 |
| ·疽菌基因组DNA的提取结果 | 第38页 |
| ·T-DNA的PCR检测结果 | 第38-40页 |
| ·致病相关突变体的生物学特性测定 | 第40-45页 |
| ·菌落形态和颜色观察 | 第40-41页 |
| ·菌株生长速率的比较 | 第41-42页 |
| ·突变体产孢量的测定及分生孢子形态观察 | 第42-44页 |
| ·分生孢子萌发及附着孢、侵染钉形成观察 | 第44-45页 |
| ·T-DNA插入位点的侧翼序列扩增和分析 | 第45-50页 |
| ·TAIL-PCR扩增 | 第45-46页 |
| ·T-DNA插入位点的侧翼序列的序列分析 | 第46-50页 |
| 4 结论与讨论 | 第50-53页 |
| ·关于遗传转化体系 | 第50页 |
| ·关于致病相关突变体的筛选 | 第50-51页 |
| ·关于TAIL-PCR | 第51-52页 |
| ·突变体库的保存 | 第52-53页 |
| 5 问题与展望 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 附录 | 第65-73页 |
| 附录1 部分生物学特性图片 | 第65-68页 |
| 附录2 突变体序列比对结果 | 第68-72页 |
| 附录3 通用实验材料与方法 | 第72-73页 |
| 附录4 主要仪器设备 | 第73页 |
