| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-24页 |
| ·海水养殖业与鱼类疾病 | 第13页 |
| ·鱼类免疫组织 | 第13-14页 |
| ·鱼类抵御细菌的免疫因子 | 第14-21页 |
| ·微生物生长抑制物 | 第14-15页 |
| ·蛋白酶抑制因子 | 第15页 |
| ·凝集素和沉淀素 | 第15页 |
| ·细胞溶素 | 第15-16页 |
| ·补体 | 第16-20页 |
| ·抗体 | 第20-21页 |
| ·鱼类对鳗弧菌的免疫防御机制 | 第21页 |
| ·鱼类的分子免疫学 | 第21-22页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 第2章 抑制性差减杂交文库的构建 | 第24-39页 |
| ·前言 | 第24页 |
| ·实验材料 | 第24-25页 |
| ·菌株、样品、主要试剂及服务 | 第24-25页 |
| ·主要仪器设备与分析软件 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-30页 |
| ·细菌注射及组织取样 | 第25页 |
| ·RNA的提取 | 第25-26页 |
| ·免疫组和对照组mRNA的纯化 | 第26页 |
| ·差减cDNA文库的构建 | 第26页 |
| ·驱动子和检测子cDNA的制备 | 第26-28页 |
| ·差减杂交 | 第28页 |
| ·巢式PCR扩增 | 第28页 |
| ·差减cDNA质粒文库的构建 | 第28-29页 |
| ·斑点杂交筛选阳性克隆 | 第29-30页 |
| ·测序以及序列分析 | 第30页 |
| ·荧光定量PCR检验差异表达的基因 | 第30页 |
| ·实验结果 | 第30-36页 |
| ·组织总RNA的提取 | 第30-31页 |
| ·差减cDNA文库的构建 | 第31-32页 |
| ·差异cDNA片段的PCR筛选鉴定 | 第32-33页 |
| ·斑点杂交筛选差异表达的片段 | 第33页 |
| ·差异cDNA片段的序列分析 | 第33页 |
| ·差异表达基因的荧光定量PCR验证 | 第33-36页 |
| ·讨论 | 第36-38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| 第3章 两个补体Bf/C2的分子克隆及特征分析 | 第39-55页 |
| ·前言 | 第39页 |
| ·实验材料 | 第39-40页 |
| ·主要试剂及服务 | 第39页 |
| ·主要仪器设备及分析软件 | 第39-40页 |
| ·实验方法 | 第40-43页 |
| ·LycBf/C2A及LycBf/C2B全长cDNA的克隆 | 第40-42页 |
| ·LycBf/C2A和LycBf/C2B的序列分析 | 第42页 |
| ·LycBf/C2A及LycBf/C2B的三维结构模拟 | 第42-43页 |
| ·实验结果 | 第43-51页 |
| ·LycBf/C2A和LycBf/C2B全长cDNA的克隆 | 第43页 |
| ·LycBf/C2A和LycBf/C2B的同源性分析 | 第43页 |
| ·LycBf/C2A及LycBf/C2B的3D模拟结构分析 | 第43-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| ·小结 | 第53-55页 |
| 第4章 LycBf/C2A和LycBf/C2B转录水平的表达分析 | 第55-61页 |
| ·前言 | 第55页 |
| ·实验材料 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-57页 |
| ·RNA的提取 | 第55页 |
| ·RNA的逆转录 | 第55-56页 |
| ·大黄鱼不同组织LycBf/C2A及LycBf/C2B基因的分布 | 第56-57页 |
| ·实验结果 | 第57-59页 |
| ·大黄鱼不同组织中LycBf/C2A和LycBf/C2B的分布 | 第57页 |
| ·免疫前后大黄鱼中LycBf/C2A和LycBf/C2B的表达差异分析 | 第57-59页 |
| ·讨论 | 第59页 |
| ·小结 | 第59-61页 |
| 第5章 补体C1抑制因子的基因克隆及粘附功能研究 | 第61-78页 |
| ·前言 | 第61页 |
| ·实验材料 | 第61-62页 |
| ·菌株及质粒 | 第61页 |
| ·主要试剂、仪器和生物软件 | 第61-62页 |
| ·实验方法 | 第62-68页 |
| ·大黄鱼补体C1抑制因子全长cDNA的克隆 | 第62页 |
| ·大黄鱼补体C1抑制因子的序列分析及进化树绘制 | 第62页 |
| ·大黄鱼补体C1抑制因子丝氨酸蛋白酶抑制剂结构域的3D模拟结构分析 | 第62-63页 |
| ·表达载体pGEX-4T-lycC1INH的构建 | 第63-64页 |
| ·大黄鱼补体C1抑制因子片段在Rossta gami中的诱导表达 | 第64-65页 |
| ·大黄鱼补体C1抑制因子片段在大肠杆菌中的表达分析 | 第65-66页 |
| ·兔抗大黄鱼补体C1抑制因子多克隆抗体的特异性的分析 | 第66页 |
| ·大黄鱼补体C1抑制因子全长蛋白的表达 | 第66-67页 |
| ·大黄鱼补体C1抑制因子全长蛋白同鳗弧菌的粘附实验 | 第67-68页 |
| ·结果 | 第68-75页 |
| ·大黄鱼补体C1抑制因子全长cDNA克隆和序列分析 | 第68页 |
| ·大黄鱼补体C1抑制因子的序列比对和进化树分析 | 第68页 |
| ·大黄鱼补体C1抑制因子丝氨酸蛋白酶抑制剂结构域的3D模拟结构分析 | 第68页 |
| ·表达菌株pGEX-4T-lycC1INH/Rosetta的构建 | 第68-71页 |
| ·大黄鱼补体C1抑制因子部分编码产物的表达及多克隆抗体的制备 | 第71-74页 |
| ·大黄鱼补体C1抑制因子全长蛋白的细菌粘附能力研究 | 第74-75页 |
| ·讨论 | 第75-77页 |
| ·小结 | 第77-78页 |
| 第6章 补体C1抑制因子转录和翻译水平的表达分析 | 第78-85页 |
| ·前言 | 第78页 |
| ·实验材料 | 第78页 |
| ·实验方法 | 第78-81页 |
| ·大黄鱼补体C1抑制因子探针的制备 | 第78-79页 |
| ·原位杂交 | 第79-80页 |
| ·大黄鱼组织蛋白的提取 | 第80页 |
| ·Bradford法测定蛋白浓度 | 第80页 |
| ·大黄鱼补体C1抑制因子的组织表达分布及免疫前后的表达差异 | 第80-81页 |
| ·实验结果 | 第81-82页 |
| ·大黄鱼各组织样品蛋白浓度的测定 | 第81-82页 |
| ·大黄鱼不同组织中补体C1抑制因子蛋白的表达分析 | 第82页 |
| ·免疫前后大黄鱼补体C1抑制因子转录水平的表达变化分析 | 第82页 |
| ·免疫前后大黄鱼补体C1抑制因子翻译水平的表达变化分析 | 第82页 |
| ·讨论 | 第82-84页 |
| ·小结 | 第84-85页 |
| 第7章 大黄鱼凝血酶原类似基因的克隆及其表达分析 | 第85-91页 |
| ·前言 | 第85页 |
| ·实验材料 | 第85页 |
| ·实验方法 | 第85-86页 |
| ·5’末端及3’末端RACE PCR | 第85-86页 |
| ·序列分析 | 第86页 |
| ·RT-PCR检验基因表达的差异性 | 第86页 |
| ·结果 | 第86-87页 |
| ·大黄鱼凝血酶原类似基因cDNA的克隆 | 第86页 |
| ·大黄鱼凝血酶原类似蛋白氨基酸序列同源性分析 | 第86页 |
| ·大黄鱼凝血酶原类似基因的表达差异分析 | 第86-87页 |
| ·讨论 | 第87-90页 |
| ·小结 | 第90-91页 |
| 第8章 结论和创新点 | 第91-93页 |
| ·主要结论 | 第91-92页 |
| ·论文创新点 | 第92页 |
| ·展望 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-106页 |
| 攻读博士学位期间撰写的论文 | 第106-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
