| 摘要 | 第2-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 缩略语 | 第9-12页 |
| 绪论 | 第12-14页 |
| 第一章 低氧下调AIF的表达水平 | 第14-44页 |
| 1.1 引言 | 第14-15页 |
| 1.2 材料与方法 | 第15-30页 |
| 1.2.1 结肠癌组织样本 | 第15-18页 |
| 1.2.2 在结肠癌组织中对AIF和 CAIX进行免疫组织化学染色 | 第18-19页 |
| 1.2.3 AIF和 CAIX表达水平的相关性分析 | 第19页 |
| 1.2.4 CAIX的高低表达与AIF的相关性分析 | 第19页 |
| 1.2.5 细胞培养和低氧处理 | 第19-20页 |
| 1.2.6 细胞RNA的提取 | 第20页 |
| 1.2.7 RNA逆转录和Quantitative real-time PCR | 第20-22页 |
| 1.2.8 Western Blot | 第22-23页 |
| 1.2.9 shRNA设计和转染 | 第23-24页 |
| 1.2.10 PLVX-HIF-1a-(35)ODD过表达质粒和细胞株的构建 | 第24-25页 |
| 1.2.11 荧光素酶报告基因质粒的构建 | 第25-26页 |
| 1.2.12 HRE mutant的构建 | 第26页 |
| 1.2.13 细胞转染和Luciferase activity检测 | 第26-27页 |
| 1.2.14 染色质免疫共沉淀(CHIP) | 第27-30页 |
| 1.2.15 统计学分析 | 第30页 |
| 1.3 实验结果 | 第30-42页 |
| 1.3.1 结肠癌组织中AIF和低氧呈现负相关性 | 第30-33页 |
| 1.3.2 细胞中低氧通过HIF-1a下调AIF的表达水平 | 第33-38页 |
| 1.3.3 AIF被鉴定为HIF-1 的一个靶基因 | 第38-42页 |
| 1.4 讨论 | 第42-44页 |
| 第二章 AIF下调促进低氧下EMT的发生 | 第44-58页 |
| 2.1 引言 | 第44-45页 |
| 2.2 材料与方法 | 第45-50页 |
| 2.2.1 质粒和稳定细胞株的构建 | 第45-47页 |
| 2.2.2 细胞形态拍照和统计 | 第47页 |
| 2.2.3 RNA样品的提取 | 第47-48页 |
| 2.2.4 逆转录和Real-time PCR | 第48页 |
| 2.2.5 细胞划痕实验 | 第48页 |
| 2.2.6 细胞侵袭实验 | 第48-49页 |
| 2.2.7 Western blot | 第49-50页 |
| 2.2.8 统计学分析 | 第50页 |
| 2.3 实验结果 | 第50-56页 |
| 2.3.1 AIF敲除引起肿瘤细胞发生EMT | 第50-52页 |
| 2.3.2 AIF过表达抑制低氧下肿瘤细胞EMT的发生 | 第52-55页 |
| 2.3.3 AIF表达水平的敲除促进了低氧下EMT的发生 | 第55-56页 |
| 2.4 讨论 | 第56-58页 |
| 第三章 AIF敲除通过促进PTEN氧化和激活AKT/GSK-3b来活化Wnt/b-catenin信号通路 | 第58-75页 |
| 3.1 引言 | 第58-59页 |
| 3.2 材料与方法 | 第59-65页 |
| 3.2.1 AIF相互作用蛋白的寻找和鉴定 | 第59-60页 |
| 3.2.2 细胞内免疫共沉淀实验 | 第60页 |
| 3.2.3 氧化型PTEN的检测 | 第60-61页 |
| 3.2.4 GST Pull down 实验 | 第61-62页 |
| 3.2.5 体外诱导表达和纯化、孵育反应以及DCP-Bio1 标记 | 第62页 |
| 3.2.6 NAC对细胞的处理 | 第62-63页 |
| 3.2.7 RNA的抽提和Quantitative real-time PCR | 第63页 |
| 3.2.8 免疫荧光 | 第63-64页 |
| 3.2.9 Western blot | 第64-65页 |
| 3.2.10 统计学分析 | 第65页 |
| 3.3 实验结果 | 第65-73页 |
| 3.3.1 抑癌蛋白PTEN与 AIF存在相互作用 | 第65-67页 |
| 3.3.2 AIF可以保护PTEN不被氧化和失活 | 第67-70页 |
| 3.3.3 AIF敲除通过引起PTEN氧化性失活活化Wnt/b-catenin信号通路 | 第70-73页 |
| 3.4 讨论 | 第73-75页 |
| 第四章 AIF的下调促进低氧下Wnt/b-catenin信号通路的活化 | 第75-83页 |
| 4.1 引言 | 第75页 |
| 4.2 材料与方法 | 第75-77页 |
| 4.2.1 氧化型PTEN的检测 | 第75页 |
| 4.2.2 RNA的抽提和Quantitative real-time PCR | 第75-76页 |
| 4.2.3 免疫荧光实验 | 第76-77页 |
| 4.2.4 Western blot | 第77页 |
| 4.2.5 统计学分析 | 第77页 |
| 4.3 实验结果 | 第77-81页 |
| 4.3.1 AIF的降低促进低氧下PTEN的氧化性失活和AKT/GSK-3b信号通路的活化 | 第77-78页 |
| 4.3.2 AIF过表达抑制低氧下b-catenin的入核 | 第78-80页 |
| 4.3.3 AIF过表达抑制低氧下Wnt/b-catenin信号通路靶基因的活化 | 第80-81页 |
| 4.4 讨论 | 第81-83页 |
| 总结 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-93页 |
| 致谢 | 第93-95页 |
| 攻读学位期间完成的学术论文 | 第95-97页 |
