| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4页 |
| 第1章 文献综述 | 第7-21页 |
| 1.1 龙涎香醇概述 | 第7-11页 |
| 1.1.1 龙涎香醇的发现及其结构 | 第7-8页 |
| 1.1.2 龙涎香醇理化性质 | 第8-9页 |
| 1.1.3 龙涎香醇的化学合成 | 第9-10页 |
| 1.1.4 酶催化合成龙涎香醇 | 第10-11页 |
| 1.2 大肠杆菌中类异戊二烯途径的改造及萜类化合物合成的研究进展 | 第11-16页 |
| 1.2.1 萜类化合物简介 | 第11-12页 |
| 1.2.2 大肠杆菌的类异戊二烯途径及其改造 | 第12-14页 |
| 1.2.3 大肠杆菌中三萜化合物的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.3 CRISPR-Cas9介导的基因组编辑技术 | 第16-19页 |
| 1.3.1 CRISPR-Cas9基因组编辑技术简介 | 第16-18页 |
| 1.3.2 大肠杆菌中的CRISPR-Cas9基因组编辑技术 | 第18-19页 |
| 1.4 本课题主要研究内容 | 第19-21页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第21-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-25页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第21-22页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.3 药品与试剂 | 第23-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-35页 |
| 2.2.1 大肠杆菌的培养与保藏 | 第25页 |
| 2.2.2 PCR扩增 | 第25-27页 |
| 2.2.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第27-28页 |
| 2.2.4 DNA片段的纯化 | 第28页 |
| 2.2.5 大肠杆菌基因组DNA的提取 | 第28页 |
| 2.2.6 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第28页 |
| 2.2.7 DNA的酶切与连接反应 | 第28-29页 |
| 2.2.8 ClonExpressⅡ快速克隆进行重组质粒的构建 | 第29页 |
| 2.2.9 大肠杆菌感受态细胞的转化(热激法) | 第29-30页 |
| 2.2.10 大肠杆菌电转化感受态的制备及电转化 | 第30-31页 |
| 2.2.11 表达gRNA的质粒的构建 | 第31页 |
| 2.2.12 CRISPR-Cas9介导的基因组编辑流程 | 第31-32页 |
| 2.2.13 薄层层析(TLC)法对龙涎香中的成分进行分离 | 第32-33页 |
| 2.2.14 D337C SHC异源基因的密码子优化及合成 | 第33页 |
| 2.2.15 从大肠杆菌中提取鲨烯和龙涎香醇 | 第33页 |
| 2.2.16 HPLC检测鲨烯含量 | 第33页 |
| 2.2.17 GC-MS检测鲨烯及龙涎香醇 | 第33-34页 |
| 2.2.18 GC-FID检测龙涎香醇含量 | 第34-35页 |
| 第3章 结果与讨论 | 第35-63页 |
| 3.1 合成鲨烯的大肠杆菌工程菌的构建 | 第35-44页 |
| 3.1.1 大肠杆菌基因组中构建鲨烯合成途径 | 第35-37页 |
| 3.1.2 鲨烯合成的检测 | 第37-41页 |
| 3.1.3 优化合成鲨烯的大肠杆菌工程菌 | 第41-44页 |
| 3.2 大肠杆菌中龙涎香醇合成模块的初步构建 | 第44-54页 |
| 3.2.1 构建D377C SHC表达载体 | 第44-45页 |
| 3.2.2 构建BmeTC表达载体 | 第45-47页 |
| 3.2.3 构建龙涎香醇合成模块 | 第47-49页 |
| 3.2.4 大肠杆菌中龙涎香醇合成的检测 | 第49-54页 |
| 3.3 D377C SHC在大肠杆菌基因组上的整合表达 | 第54-56页 |
| 3.4 龙涎香醇合成途径中的关键酶D377C SHC与BmeTC的融合表达 | 第56-63页 |
| 3.4.1 D377C SHC与BmeTC的两种形式融合蛋白的构建 | 第56-60页 |
| 3.4.2 D377C SHC与BmeTC两种形式融合蛋白的表达 | 第60-63页 |
| 第4章 结论与展望 | 第63-65页 |
| 4.1 结论 | 第63页 |
| 4.2 展望 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 附录 | 第71-73页 |
| 发表论文及参加科研情况说明 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
