| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 引言 | 第8-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-20页 |
| 1.1 周期节律蛋白NPAS2概述 | 第10-14页 |
| 1.1.1 NPAS2的基本结构 | 第10-11页 |
| 1.1.2 NPAS2与周期节律 | 第11-13页 |
| 1.1.3 NPAS2的多样功能 | 第13-14页 |
| 1.2 ERα概述 | 第14-16页 |
| 1.2.1 ERα信号转导通路 | 第14-16页 |
| 1.2.2 ERα的结构和功能 | 第16页 |
| 1.3 CyclinD1与乳腺癌 | 第16-18页 |
| 1.4 本论文的选题依据和研究内容 | 第18-20页 |
| 1.4.1 选题依据 | 第18页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第18-20页 |
| 2 过表达NPAS2对乳腺癌细胞增殖的影响 | 第20-33页 |
| 2.1 引言 | 第20页 |
| 2.2 仪器与试剂 | 第20-22页 |
| 2.2.1 仪器与设备 | 第20-21页 |
| 2.2.2 试剂 | 第21-22页 |
| 2.3 实验方法 | 第22-29页 |
| 2.3.1 HA-NPAS2质粒构建 | 第22-24页 |
| 2.3.2 质粒连接、鉴定 | 第24-25页 |
| 2.3.3 质粒提取 | 第25-26页 |
| 2.3.4 细胞培养 | 第26页 |
| 2.3.5 质粒表达载体的细胞转染 | 第26-27页 |
| 2.3.6 稳转细胞系的筛选 | 第27-28页 |
| 2.3.7 MTT检测细胞增殖 | 第28页 |
| 2.3.8 细胞集落形成实验 | 第28-29页 |
| 2.3.9 流式细胞术实验检测细胞周期 | 第29页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第29-32页 |
| 2.4.1 过表达NPAS2对乳腺癌细胞增殖的影响 | 第29-30页 |
| 2.4.2 过表达NPAS2对乳腺癌细胞周期的影响 | 第30-32页 |
| 2.5 小结 | 第32-33页 |
| 3 NPAS2对ERα转录活性的影响 | 第33-44页 |
| 3.1 引言 | 第33页 |
| 3.2 仪器与试剂 | 第33-34页 |
| 3.2.1 仪器 | 第33页 |
| 3.2.2 试剂 | 第33-34页 |
| 3.3 实验方法 | 第34-40页 |
| 3.3.1 质粒提取 | 第34-35页 |
| 3.3.2 细胞培养 | 第35页 |
| 3.3.3 质粒表达载体的细胞转染 | 第35页 |
| 3.3.4 荧光素酶报告基因实验 | 第35页 |
| 3.3.5 反转录PCR实验 | 第35-37页 |
| 3.3.6 实时定量PCR实验 | 第37-38页 |
| 3.3.7 Western blotting实验 | 第38-40页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第40-43页 |
| 3.4.1 过表达NPAS2对CyclinD1-Luc活性的影响 | 第40-42页 |
| 3.4.2 过表达NPAS2对ERα下游基因的影响 | 第42-43页 |
| 3.5 小结 | 第43-44页 |
| 4 NPAS2与ERα相互作用的研究 | 第44-55页 |
| 4.1 引言 | 第44页 |
| 4.2 仪器与试剂 | 第44-46页 |
| 4.2.1 仪器 | 第44页 |
| 4.2.2 试剂 | 第44-46页 |
| 4.3 实验方法 | 第46-48页 |
| 4.3.1 细胞培养 | 第46页 |
| 4.3.2 质粒表达载体的细胞转染 | 第46页 |
| 4.3.3 免疫荧光实验 | 第46-47页 |
| 4.3.4 考马斯亮蓝法蛋白质定量实验 | 第47页 |
| 4.3.5 Western blotting实验 | 第47-48页 |
| 4.3.6 免疫共沉淀实验(CO-IP) | 第48页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第48-54页 |
| 4.4.1 NPAS2和ERα在HEK-293T细胞中的相互作用 | 第48-50页 |
| 4.4.2 NPAS2和ERα在MCF-7细胞中的相互作用 | 第50-51页 |
| 4.4.3 NPAS2和ERα在MCF-7细胞中的亚细胞定位 | 第51-52页 |
| 4.4.4 NPAS2和ERα相互作用区域 | 第52-53页 |
| 4.4.5 过表达NPAS2对ERα蛋白水平的影响 | 第53-54页 |
| 4.5 小结 | 第54-55页 |
| 5 NPAS2抑制ERα转录活性的机制研究 | 第55-66页 |
| 5.1 引言 | 第55页 |
| 5.2 仪器与试剂 | 第55-56页 |
| 5.2.1 仪器 | 第55页 |
| 5.2.2 试剂 | 第55-56页 |
| 5.3 实验方法 | 第56-57页 |
| 5.3.1 细胞培养 | 第56页 |
| 5.3.2 质粒表达载体的细胞转染 | 第56页 |
| 5.3.3 qRT-PCR实验 | 第56页 |
| 5.3.4 CheckMate?哺乳动物双杂交 | 第56页 |
| 5.3.5 考马斯亮蓝法蛋白质定量实验 | 第56页 |
| 5.3.6 CO-IP实验 | 第56-57页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第57-64页 |
| 5.4.1 NPAS2、ERα、AIB1相互作用的研究 | 第57-61页 |
| 5.4.2 NPAS2对ERα和AIB1相互作用的影响 | 第61-63页 |
| 5.4.3 NPAS2对AIB1周期节律表达的影响 | 第63-64页 |
| 5.5 小结 | 第64-66页 |
| 结论与展望 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-78页 |
