| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3页 |
| 1 绪论 | 第7-13页 |
| 1.1 胰腺癌的治疗现状 | 第7-9页 |
| 1.2 DNA甲基化的基本功能 | 第9-10页 |
| 1.3 DNA甲基化与肿瘤 | 第10-11页 |
| 1.4 DNA甲基化靶向治疗研究现状 | 第11-12页 |
| 1.5 本文研究内容 | 第12-13页 |
| 2 胰腺癌异常高甲基化基因的筛选 | 第13-22页 |
| 2.1 材料与方法 | 第13-16页 |
| 2.1.1 数据来源 | 第13-14页 |
| 2.1.2 生物信息分析路线 | 第14-15页 |
| 2.1.3 数据处理 | 第15-16页 |
| 2.2 结果 | 第16-22页 |
| 2.2.1 异常高甲基化基因 | 第16页 |
| 2.2.2 差异高甲基化低表达基因 | 第16-20页 |
| 2.2.3 基因表达肿瘤差异性分析 | 第20-22页 |
| 3 IRX6在胰腺癌中异常高甲基化低表达 | 第22-38页 |
| 3.1 实验材料 | 第22-25页 |
| 3.1.1 胰腺癌石蜡组织及组织芯片 | 第22-23页 |
| 3.1.2 细胞株及其培养 | 第23页 |
| 3.1.3 主要仪器及耗材 | 第23-24页 |
| 3.1.4 主要试剂 | 第24-25页 |
| 3.2 实验方法 | 第25-32页 |
| 3.2.1 引物的设计 | 第25页 |
| 3.2.2 细胞的培养 | 第25-26页 |
| 3.2.3 细胞的去甲基化处理 | 第26页 |
| 3.2.4 细胞总RNA的抽提 | 第26-27页 |
| 3.2.5 RNA的逆转录 | 第27-28页 |
| 3.2.6 实时荧光定量PCR(RT-PCR) | 第28页 |
| 3.2.7 组织芯片免疫组化(IHC) | 第28-29页 |
| 3.2.8 石蜡包埋组织中DNA的提取 | 第29-30页 |
| 3.2.9 亚硫酸氢盐修饰DNA及回收 | 第30-31页 |
| 3.2.10 甲基化特异性PCR(MS-PCR) | 第31-32页 |
| 3.2.11 琼脂糖电泳 | 第32页 |
| 3.2.12 数据分析 | 第32页 |
| 3.3 实验结果 | 第32-38页 |
| 3.3.1 IRX6在胰腺癌细胞中表达失活 | 第32-33页 |
| 3.3.2 IRX6在胰腺癌组织中表达失活 | 第33-35页 |
| 3.3.3 IRX6在胰腺癌组织中异常高甲基化 | 第35-36页 |
| 3.3.4 去甲基化使IRX6在胰腺癌细胞中表达上升 | 第36-38页 |
| 4 IRX6在胰腺癌细胞中的抑癌作用 | 第38-53页 |
| 4.1 实验材料 | 第38-39页 |
| 4.1.1 慢病毒表达载体 | 第38页 |
| 4.1.2 主要仪器耗材 | 第38页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第38-39页 |
| 4.2 实验方法 | 第39-48页 |
| 4.2.1 IRX6过表达及shRNA表达载体的构建及稳转株的筛选 | 第39-45页 |
| 4.2.2 细胞总蛋白的提取 | 第45页 |
| 4.2.3 SDS-PAGE 及 Western blot | 第45-46页 |
| 4.2.4 细胞增殖实验 | 第46-47页 |
| 4.2.5 克隆形成实验 | 第47页 |
| 4.2.6 细胞毒性实验 | 第47页 |
| 4.2.7 细胞迁移实验 | 第47页 |
| 4.2.8 Transwell实验 | 第47-48页 |
| 4.3 实验结果 | 第48-53页 |
| 4.3.1 IRX6抑制胰腺癌细胞的增殖能力和克隆形成能力 | 第48-50页 |
| 4.3.2 IRX6提高胰腺癌细胞对吉西他滨的敏感性 | 第50页 |
| 4.3.3 IRX6抑制胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力 | 第50-52页 |
| 4.3.4 IRX6作用于胰腺癌细胞的EMT过程 | 第52-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 附录A 缩略词表 | 第60-62页 |
| 附录B RT-PCR引物 | 第62-63页 |
| 附录C IRX6MS-PCR及PCR引物 | 第63页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-66页 |
