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IRX6基因的异常甲基化在胰腺癌发病中的作用研究

摘要第2-3页
Abstract第3页
1 绪论第7-13页
    1.1 胰腺癌的治疗现状第7-9页
    1.2 DNA甲基化的基本功能第9-10页
    1.3 DNA甲基化与肿瘤第10-11页
    1.4 DNA甲基化靶向治疗研究现状第11-12页
    1.5 本文研究内容第12-13页
2 胰腺癌异常高甲基化基因的筛选第13-22页
    2.1 材料与方法第13-16页
        2.1.1 数据来源第13-14页
        2.1.2 生物信息分析路线第14-15页
        2.1.3 数据处理第15-16页
    2.2 结果第16-22页
        2.2.1 异常高甲基化基因第16页
        2.2.2 差异高甲基化低表达基因第16-20页
        2.2.3 基因表达肿瘤差异性分析第20-22页
3 IRX6在胰腺癌中异常高甲基化低表达第22-38页
    3.1 实验材料第22-25页
        3.1.1 胰腺癌石蜡组织及组织芯片第22-23页
        3.1.2 细胞株及其培养第23页
        3.1.3 主要仪器及耗材第23-24页
        3.1.4 主要试剂第24-25页
    3.2 实验方法第25-32页
        3.2.1 引物的设计第25页
        3.2.2 细胞的培养第25-26页
        3.2.3 细胞的去甲基化处理第26页
        3.2.4 细胞总RNA的抽提第26-27页
        3.2.5 RNA的逆转录第27-28页
        3.2.6 实时荧光定量PCR(RT-PCR)第28页
        3.2.7 组织芯片免疫组化(IHC)第28-29页
        3.2.8 石蜡包埋组织中DNA的提取第29-30页
        3.2.9 亚硫酸氢盐修饰DNA及回收第30-31页
        3.2.10 甲基化特异性PCR(MS-PCR)第31-32页
        3.2.11 琼脂糖电泳第32页
        3.2.12 数据分析第32页
    3.3 实验结果第32-38页
        3.3.1 IRX6在胰腺癌细胞中表达失活第32-33页
        3.3.2 IRX6在胰腺癌组织中表达失活第33-35页
        3.3.3 IRX6在胰腺癌组织中异常高甲基化第35-36页
        3.3.4 去甲基化使IRX6在胰腺癌细胞中表达上升第36-38页
4 IRX6在胰腺癌细胞中的抑癌作用第38-53页
    4.1 实验材料第38-39页
        4.1.1 慢病毒表达载体第38页
        4.1.2 主要仪器耗材第38页
        4.1.3 主要试剂第38-39页
    4.2 实验方法第39-48页
        4.2.1 IRX6过表达及shRNA表达载体的构建及稳转株的筛选第39-45页
        4.2.2 细胞总蛋白的提取第45页
        4.2.3 SDS-PAGE 及 Western blot第45-46页
        4.2.4 细胞增殖实验第46-47页
        4.2.5 克隆形成实验第47页
        4.2.6 细胞毒性实验第47页
        4.2.7 细胞迁移实验第47页
        4.2.8 Transwell实验第47-48页
    4.3 实验结果第48-53页
        4.3.1 IRX6抑制胰腺癌细胞的增殖能力和克隆形成能力第48-50页
        4.3.2 IRX6提高胰腺癌细胞对吉西他滨的敏感性第50页
        4.3.3 IRX6抑制胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力第50-52页
        4.3.4 IRX6作用于胰腺癌细胞的EMT过程第52-53页
结论第53-54页
参考文献第54-60页
附录A 缩略词表第60-62页
附录B RT-PCR引物第62-63页
附录C IRX6MS-PCR及PCR引物第63页
攻读硕士学位期间发表学术论文情况第63-64页
致谢第64-66页

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