| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 中英文缩略语表 | 第14-15页 |
| 1 引言 | 第15-27页 |
| 1.1 甜瓜 | 第15-16页 |
| 1.2 乙烯生物合成及信号转导 | 第16-19页 |
| 1.2.1 乙烯生物合成 | 第16-17页 |
| 1.2.2 乙烯信号转导途径 | 第17-19页 |
| 1.3 乙烯调控果实成熟 | 第19-20页 |
| 1.3.1 果实 | 第19-20页 |
| 1.3.2 乙烯在果实成熟过程中的作用 | 第20页 |
| 1.4 ERF转录因子 | 第20-26页 |
| 1.4.1 ERF转录因子的分类和发现 | 第20-21页 |
| 1.4.2 ERF转录因子的结构及其分布 | 第21-22页 |
| 1.4.3 ERF转录因子生物学功能研究进展 | 第22-26页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第26-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-53页 |
| 2.1 研究材料 | 第27-28页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第27-28页 |
| 2.1.2 菌种和质粒 | 第28页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第28页 |
| 2.2 ERF亚家族基因及蛋白序列的生物信息学分析 | 第28-29页 |
| 2.2.1 蛋白序列理化性质预测及亚细胞定位 | 第28-29页 |
| 2.2.2 信号肽、启动子元件预测 | 第29页 |
| 2.2.3 序列比对及进化分析 | 第29页 |
| 2.2.4 染色体定位 | 第29页 |
| 2.3 ERF亚家族基因的实时定量PCR | 第29-34页 |
| 2.3.1 甜瓜果实呼吸跃变期的测定 | 第29-30页 |
| 2.3.2 不同组织总RNA的提取 | 第30页 |
| 2.3.3 实时定量PCR引物设计 | 第30-33页 |
| 2.3.4 实时定量PCR分析 | 第33-34页 |
| 2.4 目的基因的cDNA克隆、过表达和RNAi载体构建 | 第34-42页 |
| 2.4.1 引物设计 | 第34-35页 |
| 2.4.2 目的基因的cDNA克隆 | 第35-38页 |
| 2.4.3 目的基因的过表达载体构建 | 第38-39页 |
| 2.4.4 目的基因的RNAi载体构建 | 第39-42页 |
| 2.5 候选基因在果实中的瞬时表达 | 第42-43页 |
| 2.5.1 候选基因表达载体转化农杆菌感受态细胞 | 第42-43页 |
| 2.5.2 侵染液制备 | 第43页 |
| 2.5.3 瞬时表达 | 第43页 |
| 2.6 目的基因的基因编辑载体构建 | 第43-47页 |
| 2.6.1 sgR NA靶序列选择及引物设计 | 第43-44页 |
| 2.6.2 靶序列接头的制备 | 第44-45页 |
| 2.6.3 sgR NA表达盒构建 | 第45页 |
| 2.6.4 sgRNA表达盒与pYLCRISPR/Cas9连接 | 第45-46页 |
| 2.6.5 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第46页 |
| 2.6.6 菌落PCR鉴定 | 第46-47页 |
| 2.7 稳定遗传转化 | 第47页 |
| 2.8 转化植株的检测与筛选 | 第47-50页 |
| 2.8.1 T_1种子PCR阳性检测 | 第47-48页 |
| 2.8.2 T_1植株阳性鉴定 | 第48-49页 |
| 2.8.3 基因编辑位点突变检测 | 第49页 |
| 2.8.4 T_2、T_3种子阳性鉴定 | 第49-50页 |
| 2.9 T_3代果实采后农艺性状及生理指标测定 | 第50页 |
| 2.9.1 农艺性状测定 | 第50页 |
| 2.9.2 生理指标测定 | 第50页 |
| 2.10 T_3果实中乙烯合成关键酶基因的表达分析 | 第50-53页 |
| 2.10.1 甜瓜ACS全基因组鉴定 | 第50-51页 |
| 2.10.2 甜瓜ACS、ACO启动子元件预测 | 第51页 |
| 2.10.3 T_3果实中ACO、ACS基因的表达分析 | 第51-53页 |
| 3 结果与分析 | 第53-102页 |
| 3.1 ERF亚家族基因及蛋白序列的生物信息学特性 | 第53-61页 |
| 3.1.1 蛋白序列的理化性质及亚细胞定位 | 第53-55页 |
| 3.1.2 信号肽及启动子元件 | 第55-59页 |
| 3.1.3 甜瓜、拟南芥和番茄ERF亚家族成员的进化关系 | 第59-60页 |
| 3.1.4 ERF亚家族基因的染色体定位 | 第60-61页 |
| 3.2 甜瓜ERF亚家族基因的表达谱分析 | 第61-66页 |
| 3.2.1 甜瓜果实的呼吸跃变 | 第61-62页 |
| 3.2.2 ERF基因的表达特性 | 第62-66页 |
| 3.3 CmERFⅠ-18、Ⅲ-13和Ⅵ-2的cDNA克隆及表达载体构建 | 第66-76页 |
| 3.3.1 cDNA克隆及序列分析 | 第67-69页 |
| 3.3.2 CmERFⅠ-18、C,ERFⅢ-13和CmERFⅥ-2过表达载体构建 | 第69-71页 |
| 3.3.3 CmERFⅠ-18、CmERFⅢ-13和CmERFⅥ-2的RNAi载体构建 | 第71-76页 |
| 3.4 瞬时表达验证候选基因的功能 | 第76-78页 |
| 3.5 候选基因的基因编辑载体构建 | 第78-81页 |
| 3.5.1 靶位点选择 | 第78页 |
| 3.5.2 靶接头与中间载体的连接方式 | 第78-79页 |
| 3.5.3 sgRNA表达盒构建的第一轮PCR扩增 | 第79页 |
| 3.5.4 sgRNA表达盒构建的第二轮PCR扩增 | 第79-80页 |
| 3.5.5 菌落PCR鉴定及测序验证 | 第80-81页 |
| 3.6 候选基因的稳定遗传转化 | 第81页 |
| 3.7 转基因植株的获得及其表型鉴定 | 第81-91页 |
| 3.7.1 T_1代种子的阳性率 | 第81页 |
| 3.7.2 T_1阳性植株获得及其果实的成熟期 | 第81-83页 |
| 3.7.3 基因编辑的突变效率 | 第83-88页 |
| 3.7.4 T_3纯合株系获得及其成熟期 | 第88-90页 |
| 3.7.5 CmERFⅠ-15和CmERFⅡ-9在T_3果实中的表达量 | 第90-91页 |
| 3.8 T_3果实的农艺性状和生理特性 | 第91-97页 |
| 3.8.1 T_3果实的农艺性状 | 第91-93页 |
| 3.8.2 T_3果实的生理特性 | 第93-97页 |
| 3.9 ACS和ACO在转基因果实中的表达分析 | 第97-102页 |
| 3.9.1 甜瓜ACS基因家族成员 | 第97页 |
| 3.9.2 ACS和ACO启动子元件预测 | 第97-98页 |
| 3.9.3 ACS和ACO基因在T_3果实中的表达量 | 第98-102页 |
| 4 讨论 | 第102-105页 |
| 4.1 利用生物信息学方法预测ERF基因的功能 | 第102-103页 |
| 4.2 利用表达谱分析ERF基因的功能 | 第103页 |
| 4.3 ERF在果实成熟中的功能与作用机理 | 第103-105页 |
| 5 结论与创新点 | 第105-106页 |
| 5.1 结论 | 第105页 |
| 5.2 创新点 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-115页 |
| 在读期间发表论文情况 | 第115-116页 |
| 致谢 | 第116页 |
