| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-19页 |
| 1.1 棉酚的研究进展 | 第10-11页 |
| 1.2 棉酚的功能及用途 | 第11-12页 |
| 1.3 低酚棉的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.4 棉酚的生物合成 | 第13-15页 |
| 1.5 杜松烯合酶的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.6 CRISPR/Cas9在作物中的应用 | 第16-18页 |
| 1.7 本试验的研究目的 | 第18-19页 |
| 2 材料和方法 | 第19-30页 |
| 2.1 试验材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第19页 |
| 2.1.2 菌株和载体 | 第19页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第19-20页 |
| 2.2 方法 | 第20-30页 |
| 2.2.1 GhCAD1的CRISPR/cas9载体构建 | 第20-24页 |
| 2.2.1.1 GhCAD1的系统进化 | 第20页 |
| 2.2.1.2 CAD1-A基因sgRNA的设计 | 第20页 |
| 2.2.1.3 CAD1-C基因sgRNA的设计 | 第20页 |
| 2.2.1.4 CRISPR-CAD1-A/C载体构建 | 第20-23页 |
| 2.2.1.5 基因编辑情况的检测 | 第23-24页 |
| 2.2.2 农杆菌介导的遗传转化 | 第24-25页 |
| 2.2.2.1 电击转化农杆菌 | 第24页 |
| 2.2.2.2 棉花的遗传转化 | 第24-25页 |
| 2.2.3 转基因棉花的分子鉴定 | 第25-26页 |
| 2.2.3.1 转基因植株的阳性检测 | 第25-26页 |
| 2.2.3.2 转基因植株的拷贝数分析 | 第26页 |
| 2.2.4 转基因棉花目的基因的表达量测定 | 第26-28页 |
| 2.2.4.1 棉花种子总RNA的提取及反转录 | 第26页 |
| 2.2.4.2 目的基因表达量测定 | 第26-28页 |
| 2.2.5 棉酚含量的测定 | 第28-29页 |
| 2.2.5.1 待测样品的取样方法 | 第28页 |
| 2.2.5.2 棉酚的提取方法 | 第28页 |
| 2.2.5.3 棉酚的测定方法 | 第28-29页 |
| 2.2.6 田间农艺性状测定 | 第29-30页 |
| 3 结果和分析 | 第30-47页 |
| 3.1 GhCAD1-RNAi载体的遗传转化及功能分析 | 第30-40页 |
| 3.1.1 αGP-CAD1-RNAi表达载体在陆地棉中的遗传转化 | 第30-31页 |
| 3.1.2 转基因植株T0代分子检测及拷贝数鉴定 | 第31-32页 |
| 3.1.3 转基因植株T0代种子棉酚含量 | 第32-33页 |
| 3.1.4 转基因植株T1代分子鉴定及基因表达量测定 | 第33-36页 |
| 3.1.5 转基因植株T1代不同组织棉酚含量测定 | 第36-38页 |
| 3.1.6 转基因植株种子表型 | 第38-39页 |
| 3.1.7 转基因植株T1代农艺性状考察 | 第39-40页 |
| 3.2 CRISPR-CAD1-A/C载体的遗传转化及功能分析 | 第40-47页 |
| 3.2.1 GhCAD1的同源性分析 | 第40页 |
| 3.2.2 构建CRISPR-CAD1-A/C载体的过程 | 第40-43页 |
| 3.2.3 CRISPR载体的遗传转化 | 第43-44页 |
| 3.2.4 CRISPR-CAD1-A转基因植株的分子鉴定 | 第44页 |
| 3.2.5 基因编辑结果及分析 | 第44-46页 |
| 3.2.6 CRISPR-CAD1-A转基因T0代种子棉酚含量 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-51页 |
| 4.1 GhCAD1基因不同类型在酚代谢中的作用 | 第47页 |
| 4.2 调控GhCAD1基因效果的差异分析 | 第47-49页 |
| 4.3 CRISPR/cas9系统在低酚棉育种中的作用 | 第49页 |
| 4.4 低酚棉育种的其他途径 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 附录1 | 第58页 |
| 附录2 | 第58-59页 |
| 附录3 | 第59-64页 |
| 附录4 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
