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水稻DNA甲基转移酶基因CMT2/3抑制材料的构建和效应研究

摘要第6-7页
Abstract第7页
缩略词表第8-9页
1 前言第9-25页
    1.1 研究问题的由来第9-10页
    1.2 文献综述第10-24页
        1.2.1 表观遗传学的概念第10页
        1.2.2 表观修饰第10-24页
            1.2.2.1 DNA甲基化第10-20页
            1.2.2.2 组蛋白甲基化修饰第20-23页
            1.2.2.3 染色质变构因子DDM1与DNA甲基化的关系第23-24页
    1.3 研究的目的和意义第24-25页
2 材料与方法第25-29页
    2.1 实验材料第25-26页
        2.1.1 水稻材料第25页
        2.1.2 菌株第25页
        2.1.3 质粒第25-26页
        2.1.4 基因序列信息获取和分析第26页
    2.2 实验方法第26-29页
        2.2.1 遗传转化载体的构建第26页
        2.2.2 农杆菌介导的水稻遗传转化第26-27页
        2.2.3 水稻叶片DNA抽提第27-28页
            2.2.3.1 CTAB法抽提DNA第27页
            2.2.3.2 高质量叶片基因组DNA抽提第27-28页
        2.2.4 RNA抽提第28页
        2.2.5 花粉碘-碘化钾染色第28页
        2.2.6 RT-PCR和Real-timePCR第28-29页
        2.2.7 Southern杂交第29页
3 结果与分析第29-51页
    3.1 水稻中OsCMT3a/b和OsCMT2的蛋白序列同源比对第29-35页
    3.2 OsCMT2基因材料创建第35-39页
        3.2.1 OsCMT2RNAi抑制材料的鉴定第35-36页
        3.2.2 Oscmt2突变体鉴定第36-38页
        3.2.3 利用CRISPR-Cas9体系创建Oscmt2敲除材料第38-39页
    3.3 OsCMT3a基因材料创建第39-46页
        3.3.1 OsCMT3a的RNAi抑制材料的鉴定第39-40页
        3.3.2 OsCMT3aRNAi抑制材料具有明显的生长发育缺陷第40-45页
        3.3.3 CRISPR-CAS9体系构建的Oscmt3a有明显生长发育缺陷第45-46页
    3.4 OsCMT3b基因材料创建及突变体的鉴定第46-48页
    3.5 继续利用CRISPR-Cas9体系构建的多基因材料第48-51页
4 讨论第51-53页
    4.1 水稻CMT家族甲基转移酶之间可能存在功能冗余第51页
    4.2 水稻OsCMT2和OsDRM2在调控CHH序列甲基化上的差异第51页
    4.3 水稻CMT家族与染色质变构因子在调控非CG甲基化上的关系第51-52页
    4.4 水稻CMT家族和组蛋白甲基转移酶调控非CG甲基化上的关系第52页
    4.5 CMT甲基转移酶调控途径互作蛋白寻找第52页
    4.6 计划通过BS-seq测量Oscmt2和Oscmt3突变体DNA甲基化第52-53页
参考文献第53-64页
附录第64-67页
    附录 Ⅰ本研究中用到的引物信息第64-66页
    附录 Ⅱ本研究中涉及的基因及基本信息汇总第66-67页
致谢第67页

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