摘要 | 第6-7页 |
Abstract | 第7页 |
缩略词表 | 第8-9页 |
1 前言 | 第9-25页 |
1.1 研究问题的由来 | 第9-10页 |
1.2 文献综述 | 第10-24页 |
1.2.1 表观遗传学的概念 | 第10页 |
1.2.2 表观修饰 | 第10-24页 |
1.2.2.1 DNA甲基化 | 第10-20页 |
1.2.2.2 组蛋白甲基化修饰 | 第20-23页 |
1.2.2.3 染色质变构因子DDM1与DNA甲基化的关系 | 第23-24页 |
1.3 研究的目的和意义 | 第24-25页 |
2 材料与方法 | 第25-29页 |
2.1 实验材料 | 第25-26页 |
2.1.1 水稻材料 | 第25页 |
2.1.2 菌株 | 第25页 |
2.1.3 质粒 | 第25-26页 |
2.1.4 基因序列信息获取和分析 | 第26页 |
2.2 实验方法 | 第26-29页 |
2.2.1 遗传转化载体的构建 | 第26页 |
2.2.2 农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第26-27页 |
2.2.3 水稻叶片DNA抽提 | 第27-28页 |
2.2.3.1 CTAB法抽提DNA | 第27页 |
2.2.3.2 高质量叶片基因组DNA抽提 | 第27-28页 |
2.2.4 RNA抽提 | 第28页 |
2.2.5 花粉碘-碘化钾染色 | 第28页 |
2.2.6 RT-PCR和Real-timePCR | 第28-29页 |
2.2.7 Southern杂交 | 第29页 |
3 结果与分析 | 第29-51页 |
3.1 水稻中OsCMT3a/b和OsCMT2的蛋白序列同源比对 | 第29-35页 |
3.2 OsCMT2基因材料创建 | 第35-39页 |
3.2.1 OsCMT2RNAi抑制材料的鉴定 | 第35-36页 |
3.2.2 Oscmt2突变体鉴定 | 第36-38页 |
3.2.3 利用CRISPR-Cas9体系创建Oscmt2敲除材料 | 第38-39页 |
3.3 OsCMT3a基因材料创建 | 第39-46页 |
3.3.1 OsCMT3a的RNAi抑制材料的鉴定 | 第39-40页 |
3.3.2 OsCMT3aRNAi抑制材料具有明显的生长发育缺陷 | 第40-45页 |
3.3.3 CRISPR-CAS9体系构建的Oscmt3a有明显生长发育缺陷 | 第45-46页 |
3.4 OsCMT3b基因材料创建及突变体的鉴定 | 第46-48页 |
3.5 继续利用CRISPR-Cas9体系构建的多基因材料 | 第48-51页 |
4 讨论 | 第51-53页 |
4.1 水稻CMT家族甲基转移酶之间可能存在功能冗余 | 第51页 |
4.2 水稻OsCMT2和OsDRM2在调控CHH序列甲基化上的差异 | 第51页 |
4.3 水稻CMT家族与染色质变构因子在调控非CG甲基化上的关系 | 第51-52页 |
4.4 水稻CMT家族和组蛋白甲基转移酶调控非CG甲基化上的关系 | 第52页 |
4.5 CMT甲基转移酶调控途径互作蛋白寻找 | 第52页 |
4.6 计划通过BS-seq测量Oscmt2和Oscmt3突变体DNA甲基化 | 第52-53页 |
参考文献 | 第53-64页 |
附录 | 第64-67页 |
附录 Ⅰ本研究中用到的引物信息 | 第64-66页 |
附录 Ⅱ本研究中涉及的基因及基本信息汇总 | 第66-67页 |
致谢 | 第67页 |