| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第1章 文献综述 | 第15-29页 |
| 1.1 隐花色素的发现和分类 | 第15-16页 |
| 1.2 隐花色素的结构 | 第16-17页 |
| 1.3 隐花色素的功能 | 第17-20页 |
| 1.3.1 幼苗的去黄化作用 | 第18页 |
| 1.3.2 光周期控制的开花时间的调节 | 第18-19页 |
| 1.3.3 调节生物钟 | 第19页 |
| 1.3.4 光刺激下保卫细胞的发育和气孔的开放 | 第19-20页 |
| 1.3.5 其他可能的功能 | 第20页 |
| 1.4 隐花色素的光化学特性 | 第20-22页 |
| 1.4.1 蓝光依赖的隐花色素的磷酸化 | 第21-22页 |
| 1.4.2 蓝光依赖下CRY2的降解 | 第22页 |
| 1.5 隐花色素介导的蓝光信号传导 | 第22-25页 |
| 1.5.1 CRY2-CIBs信号通路 | 第22-23页 |
| 1.5.2 CRY-SPA1/COP1信号通路 | 第23-25页 |
| 1.6 bHLH家族 | 第25-28页 |
| 1.6.1 bHLH的结构 | 第25页 |
| 1.6.2 bHLH蛋白的功能 | 第25-26页 |
| 1.6.3 CIB1的发现与结构分析 | 第26页 |
| 1.6.4 CIB蛋白家族成员发现与功能 | 第26-28页 |
| 1.7 立题依据 | 第28-29页 |
| 第2章 载体构建 | 第29-40页 |
| 2.1 载体信息 | 第29-30页 |
| 2.2 载体构建实验材料 | 第30-31页 |
| 2.2.1 基因序列 | 第30页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第30-31页 |
| 2.2.3 药品及培养基配制 | 第31页 |
| 2.3 实验方法 | 第31-38页 |
| 2.3.1 聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因 | 第31-32页 |
| 2.3.2 回收PCR产物 | 第32-33页 |
| 2.3.3 载体质粒提取 | 第33-34页 |
| 2.3.4 载体的酶切反应和线性化载体的回收 | 第34页 |
| 2.3.5 目的片段与载体的In-Fusion连接反应 | 第34-35页 |
| 2.3.6 重组质粒转化大肠杆菌 | 第35页 |
| 2.3.7 阳性克隆的鉴定 | 第35-36页 |
| 2.3.8 二次酶切 | 第36-37页 |
| 2.3.9 目的片段与载体的In-Fusion连接反应 | 第37页 |
| 2.3.10 重组质粒转化大肠杆菌 | 第37页 |
| 2.3.11 阳性克隆的鉴定 | 第37-38页 |
| 2.4 结果与分析 | 第38-40页 |
| 2.4.1 pDT7G-UBQ10::cGR-CRY2载体构建 | 第38页 |
| 2.4.2 pDT7G-ACT2::CIB3-MYC-UBQ10::cGR-CRY2载体构建 | 第38-40页 |
| 第3章 CIB3和CRY2共表达的转基因拟南芥鉴定 | 第40-48页 |
| 3.1 实验材料 | 第40-42页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第40页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第40页 |
| 3.1.3 实验菌种和载体 | 第40页 |
| 3.1.4 药品 | 第40-41页 |
| 3.1.5 免疫印迹实验所需溶剂及配制方法 | 第41页 |
| 3.1.6 其它 | 第41-42页 |
| 3.2 实验方法 | 第42-45页 |
| 3.2.1 农杆菌电击转化感受态细胞的制备 | 第42页 |
| 3.2.2 重组质粒转化农杆菌 | 第42-43页 |
| 3.2.3 农杆菌蘸花法侵染拟南芥 | 第43-44页 |
| 3.2.3.1 拟南芥种植 | 第43页 |
| 3.2.3.2 蘸花侵染拟南芥 | 第43页 |
| 3.2.3.3 Basta初步筛选 | 第43-44页 |
| 3.2.4 免疫印迹实验 | 第44-45页 |
| 3.2.4.1 SDS-PAGE凝胶配制 | 第44-45页 |
| 3.2.4.2 免疫印迹实验 | 第45页 |
| 3.3 结果与分析 | 第45-48页 |
| 3.3.1 转基因植物T3或T4代鉴定 | 第45-48页 |
| 3.3.1.1 (CIB3-CRY2)/rdr6转基因拟南芥T4代鉴定 | 第46页 |
| 3.3.1.2 (CIB3-CRY2)/cry2转基因植物鉴定结果 | 第46-48页 |
| 第4章 CIB3和CRY2共表达的转基因拟南芥开花时间的表型鉴定 | 第48-52页 |
| 4.1 实验材料 | 第48页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第48页 |
| 4.1.2 药品及配制方法 | 第48页 |
| 4.2 实验方法 | 第48-49页 |
| 4.2.1 播种 | 第48-49页 |
| 4.2.2 Dex与Mock处理方法 | 第49页 |
| 4.2.3 记录开花时间及叶片数 | 第49页 |
| 4.3 结果与分析 | 第49-52页 |
| 4.3.1 (CIB3-CRY2)/rdr6转基因拟南芥开花表型鉴定 | 第49-50页 |
| 4.3.2 (CIB3-CRY2)/cry2转基因拟南芥开花表型鉴定 | 第50-52页 |
| 第5章 CIB3过表达转基因拟南芥中开花基因的mRNA表达变化 | 第52-60页 |
| 5.1 实验材料 | 第52页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第52页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第52页 |
| 5.1.3 药品配制 | 第52页 |
| 5.2 实验方法 | 第52-55页 |
| 5.2.1 拟南芥幼苗的培养 | 第52-53页 |
| 5.2.2 植物总RNA的提取 | 第53页 |
| 5.2.3 cDNA第一链的合成 | 第53-54页 |
| 5.2.4 实时荧光定量PCR(Qpcr) | 第54-55页 |
| 5.2.5 Qpcr引物 | 第55页 |
| 5.3 结果与分析 | 第55-60页 |
| 5.3.1 拟南芥总RNA提取的质量检测 | 第55-56页 |
| 5.3.2 CIB3促进FT mRNA的表达 | 第56-58页 |
| 5.3.3 CIB3抑制FLC mRNA的表达 | 第58-60页 |
| 第6章 CIB3与CRY2蛋白相互作用的验证 | 第60-71页 |
| 6.1 酵母双杂交实验验证CIB3与CRY2蛋白相互作用 | 第60-65页 |
| 6.1.1 实验材料 | 第60-62页 |
| 6.1.1.1 实验菌株、载体 | 第60页 |
| 6.1.1.2 主要仪器 | 第60-61页 |
| 6.1.1.3 主要试剂及培养基配制 | 第61-62页 |
| 6.1.2 实验方法 | 第62-64页 |
| 6.1.2.1 PCR扩增反应引物设计 | 第62页 |
| 6.1.2.2 酵母转化 | 第62-64页 |
| 6.1.3 结果与分析 | 第64-65页 |
| 6.2 人胚肾细胞(HEK293T)表达植物蛋白及Co-IP实验验证CIB3与CRY2蛋白相互作用 | 第65-71页 |
| 6.2.1 实验材料 | 第65-67页 |
| 6.2.1.1 细胞材料 | 第65页 |
| 6.2.1.2 主要仪器 | 第65-66页 |
| 6.2.1.3 主要试剂及培养基配置 | 第66-67页 |
| 6.2.1.4 引物 | 第67页 |
| 6.2.1.5 载体 | 第67页 |
| 6.2.2 实验方法 | 第67-69页 |
| 6.2.2.1 HEK293T细胞的复苏 | 第67页 |
| 6.2.2.2 HEK293T细胞的继代培养和铺板 | 第67-68页 |
| 6.2.2.3 磷酸钙法转染HEK293T细胞 | 第68页 |
| 6.2.2.4 细胞收集及裂解 | 第68页 |
| 6.2.2.5 免疫共沉淀实验(Co-IP) | 第68-69页 |
| 6.2.3 结果与分析 | 第69-71页 |
| 第7章 结论与讨论 | 第71-74页 |
| 7.1 结论 | 第71-72页 |
| 7.2 讨论 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-81页 |
| 作者简介 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
