| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-14页 |
| 综述部分 | 第14-37页 |
| 第一章 牛乳腺上皮细胞研究进展 | 第14-22页 |
| ·牛乳腺细胞体外培养发展历程 | 第14-17页 |
| ·影响牛乳腺细胞体外增殖分化的因素 | 第17-19页 |
| ·激素 | 第17页 |
| ·细胞因子 | 第17-18页 |
| ·细胞外基质 | 第18-19页 |
| ·牛乳腺细胞的应用 | 第19-20页 |
| ·医学领域 | 第19-20页 |
| ·乳腺生物反应器 | 第20页 |
| ·问题和展望 | 第20-22页 |
| 第二章 体外细胞增殖的分子学方法研究进展 | 第22-31页 |
| ·端粒酶与细胞增殖调控 | 第22-25页 |
| ·端粒和端粒酶结构 | 第22-23页 |
| ·端粒酶与细胞增殖研究进展 | 第23-25页 |
| ·SV40 与细胞增殖调控 | 第25-27页 |
| ·SV 40 生物学特征 | 第25-26页 |
| ·SV40 与细胞增殖研究进展 | 第26-27页 |
| ·c-Myc 与细胞增殖研究进展 | 第27-28页 |
| ·c-Myc 生物学特征 | 第27页 |
| ·c-Myc 与细胞增殖研究进展 | 第27-28页 |
| ·HPV E6 和 E7 与细胞增殖研究进展 | 第28-30页 |
| ·HPV E6 和E7 生物学特征 | 第28-29页 |
| ·HPV E6, E7 与细胞增殖研究进展 | 第29-30页 |
| ·问题与前景 | 第30-31页 |
| 第三章 腺病毒及其在生物领域中的应用 | 第31-37页 |
| ·腺病毒分子生物学特征 | 第31-33页 |
| ·腺病毒基因组结构和功能 | 第31-32页 |
| ·腺病毒基因转录和复制 | 第32页 |
| ·腺病毒感染途径 | 第32-33页 |
| ·AdEasyTM 技术 | 第33-34页 |
| ·AdEasyTM 系统概要 | 第33页 |
| ·腺病毒载体构建 | 第33-34页 |
| ·腺病毒分子领域研究进展 | 第34-36页 |
| ·前景展望 | 第36-37页 |
| 试验研究 | 第37-88页 |
| 第四章 牛乳腺上皮细胞的体外分离培养与生物学特征 | 第37-50页 |
| ·材料与方法 | 第37-41页 |
| ·材料 | 第37-38页 |
| ·方法 | 第38-41页 |
| ·结果 | 第41-47页 |
| ·组织块迁移法获得的bMGEs 细胞生物学特征 | 第41-43页 |
| ·免疫荧光结果 | 第43页 |
| ·bMGEs 核型分析 | 第43-44页 |
| ·不同体外培养条件对bMGEs 生长的影响 | 第44页 |
| ·bMGEs 转染效率鉴定 | 第44-45页 |
| ·pEGFP-hTERT 转染bMGEs 转染效率鉴定 | 第45-47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| ·乳腺细胞的分离培养 | 第47-48页 |
| ·bMGEs 体外培养条件优化 | 第48页 |
| ·bMGEs 转染效率鉴定及优化 | 第48-49页 |
| ·小结 | 第49-50页 |
| 第五章 hTERT 基因重组腺病毒载体构建及牛乳腺细胞的表达 | 第50-64页 |
| ·材料和方法 | 第50-54页 |
| ·材料 | 第50-51页 |
| ·方法 | 第51-54页 |
| ·结果 | 第54-62页 |
| ·重组腺病毒载体构建 | 第54-55页 |
| ·重组腺病毒包装 | 第55-56页 |
| ·荧光显微镜比较真核表达载体和腺病毒的转染效率 | 第56页 |
| ·流式细胞比较真核表达载体和腺病毒载体的转染效率 | 第56-58页 |
| ·表达载体的阳性克隆率 | 第58页 |
| ·阳性细胞特性 | 第58-60页 |
| ·hTERT-bMGEs 中hTERT 的mRNA 表达 | 第60页 |
| ·hTERT 的序列结果分析 | 第60页 |
| ·hTERT-bMGEs 中hTERT 的表达时序性 | 第60-61页 |
| ·端粒酶活性检测 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-63页 |
| ·小结 | 第63-64页 |
| 第六章 hTERT-bMGEs 的体外生物学特性检测 | 第64-78页 |
| ·材料和方法 | 第64-66页 |
| ·材料 | 第64页 |
| ·方法 | 第64-66页 |
| ·结果 | 第66-74页 |
| ·Western blot 检测β-酪蛋白的表达 | 第66-67页 |
| ·hTERT-bMGEs 增殖效率检测 | 第67-69页 |
| ·hTERT-bMGEs 增殖可能机制 | 第69-71页 |
| ·hTERT-bMGEs 细胞特性检测 | 第71-74页 |
| ·讨论 | 第74-76页 |
| ·小结 | 第76-78页 |
| 第七章 hTERT-bMGEs 的转基因及核移植功能检测 | 第78-88页 |
| ·材料和方法 | 第78-81页 |
| ·细胞株和载体 | 第78页 |
| ·主要试剂 | 第78页 |
| ·主要仪器 | 第78-79页 |
| ·hTERT-bMGEs 转染效率的检测 | 第79页 |
| ·hTERT-bMGEs 基因转染功能的检测 | 第79页 |
| ·hTERT-bMGEs 核移植囊胚发育检测 | 第79-81页 |
| ·结果 | 第81-86页 |
| ·乳腺特异性表达载体pEBH | 第81页 |
| ·荧光显微镜和流式细胞仪鉴定hTERT-bMGEs 的转染效率 | 第81-82页 |
| ·表达载体的阳性克隆率 | 第82-83页 |
| ·hTERT-bMGEs 评估表达载体 | 第83-84页 |
| ·hTERT-bMGEs 对核移植胚胎体外发育的影响 | 第84-86页 |
| ·讨论 | 第86-87页 |
| ·小结 | 第87-88页 |
| 全文结论 | 第88-89页 |
| 创新之处和进一步研究的课题 | 第89-90页 |
| 创新之处 | 第89页 |
| 进一步研究的课题 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-102页 |
| 附录一 主要溶液配制 | 第102-107页 |
| 附录二 主要仪器设备 | 第107-109页 |
| 缩略词 | 第109-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 作者简介 | 第112-113页 |
