| 符号说明 | 第4-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-28页 |
| 1.1 花色苷简介 | 第13-15页 |
| 1.1.1 结构 | 第13-14页 |
| 1.1.2 化学性质 | 第14-15页 |
| 1.2 花色苷合成途径中相关基因的简介 | 第15-17页 |
| 1.2.1 结构基因 | 第15页 |
| 1.2.2 调节基因 | 第15-17页 |
| 1.3 花色苷生成过程中的调节酶 | 第17-19页 |
| 1.3.1 苯丙氨酸结氨酶(PAL) | 第18页 |
| 1.3.2 查尔酮合成酶(CHS) | 第18页 |
| 1.3.3 二氢黄酮醇还原酶(DFR) | 第18页 |
| 1.3.4 类黄酮3'脱氢酶(F3'H) | 第18-19页 |
| 1.3.5 类黄酮糖基转移酶(UFGT) | 第19页 |
| 1.4 影响花色苷颜色和稳定性的因素 | 第19页 |
| 1.5 影响花青素形成和积累的因子 | 第19-23页 |
| 1.5.1 基因调控对花青素生物合成的影响 | 第20页 |
| 1.5.2 植物激素对花青素积累的影响 | 第20-21页 |
| 1.5.3 非激素化学药品对花青素生物合成的影响 | 第21页 |
| 1.5.4 环境对花青素生物合成的影响 | 第21-23页 |
| 1.5.4.1 光照 | 第22页 |
| 1.5.4.2 紫外 | 第22页 |
| 1.5.4.3 温度 | 第22页 |
| 1.5.4.4 水分 | 第22-23页 |
| 1.6 花色苷的生理活性功能介绍 | 第23-26页 |
| 1.6.1 降低血清及肝脏中的脂肪含量的作用 | 第23-24页 |
| 1.6.2 血糖 | 第24页 |
| 1.6.3 缺血性心脏病 | 第24-25页 |
| 1.6.4 眼科 | 第25-26页 |
| 1.6.4.1 对近视的抑制作用和对眼部疲劳缓和作用 | 第25页 |
| 1.6.4.2 改善暗适应 | 第25页 |
| 1.6.4.3 增加青光眼视网膜血流量 | 第25-26页 |
| 1.6.5 脑部功能 | 第26页 |
| 1.7 本研究的目的意义 | 第26-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-30页 |
| 2.1.1 植物材料和生长条件 | 第28页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第28页 |
| 2.1.3 酶及生化试剂 | 第28页 |
| 2.1.4 PCR 引物 | 第28-29页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第29-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-46页 |
| 2.2.1 目的基因的分离 | 第30-33页 |
| 2.2.1.1 植物组织总RNA的提取 | 第30页 |
| 2.2.1.2 甲醛变性胶电泳检测 RNA | 第30-31页 |
| 2.2.1.3 反转录cDNA第一条链的合成 | 第31页 |
| 2.2.1.4 PCR 扩增 | 第31-32页 |
| 2.2.1.5 DNA目的片段的回收 | 第32页 |
| 2.2.1.6 连接反应 | 第32页 |
| 2.2.1.7 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第32-33页 |
| 2.2.1.8 质粒小提试剂盒提取质粒DNA | 第33页 |
| 2.2.1.9 质粒DNA的酶切鉴定 | 第33页 |
| 2.2.1.10 序列测定 | 第33页 |
| 2.2.2 转化拟南芥用过表达载体的构建 | 第33-35页 |
| 2.2.3 根癌农杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第35页 |
| 2.2.3.1 农杆菌感受态细胞的制备 | 第35页 |
| 2.2.3.2 电击法转化农杆菌 | 第35页 |
| 2.2.4 拟南芥的无土栽培、转化及分析 | 第35-39页 |
| 2.2.4.1 无土栽培 | 第35-36页 |
| 2.2.4.2 拟南芥转化 | 第36-37页 |
| 2.2.4.3 转基因植株分析 | 第37页 |
| 2.2.4.4 拟南芥的鉴定 | 第37-39页 |
| 2.2.5 TaUFGT-4蛋白体外表达及其功能验证 | 第39-45页 |
| 2.2.5.1 重组真核表达载体pPICZα-A-TαUFGT-4的构建 | 第39-40页 |
| 2.2.5.2 电转化法毕赤酵母GSll5感受态细胞的制备 | 第40-41页 |
| 2.2.5.3 重组表达载体的线性化 | 第41页 |
| 2.2.5.4 重组表达载体电击转化酵母感受态细胞 | 第41页 |
| 2.2.5.5 酵母转化子的筛选与鉴定 | 第41-42页 |
| 2.2.5.6 TαUFGT-4基因在毕赤酵母中的诱导表达 | 第42-43页 |
| 2.2.5.7 表达产物及纯化后酶蛋白SDS-PAGE分析 | 第43-44页 |
| 2.2.5.8 TaUFGT-4蛋白的纯化 | 第44页 |
| 2.2.5.9 体外酶活检测 | 第44-45页 |
| 2.2.6 TαUFGT-4基因的表达模式分析 | 第45-46页 |
| 2.2.6.1 取材 | 第45页 |
| 2.2.6.2 小麦基因的组织特异性表达检测 | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-56页 |
| 3.1 TαUFGT-4基因的克隆 | 第46页 |
| 3.2 TαUFGTs与不同来源的同源蛋白的进化分析 | 第46-47页 |
| 3.3 TαUFGT-4基因在拟南芥中的表达及其表型分析 | 第47-50页 |
| 3.3.1 TαUFGT-4过表达载体构建 | 第47-49页 |
| 3.3.2 拟南芥中过表达TαUFGT-4的表型 | 第49页 |
| 3.3.3 定量鉴定拟南芥转基因植株 | 第49-50页 |
| 3.4 TαUFGT-4蛋白体外表达及其功能验证 | 第50-54页 |
| 3.4.1 重组真核表达载体pPICZαA-TαUFGT-4的构建 | 第50-51页 |
| 3.4.2 重组TaUFGT-4蛋白的表达及纯化 | 第51-54页 |
| 3.4.2.1 不同诱导时间对蛋白表达的影响 | 第51-52页 |
| 3.4.2.2 重组TaUFGT-4蛋白的纯化 | 第52-53页 |
| 3.4.2.3 体外酶活反应的检测(HPLC法) | 第53-54页 |
| 3.5 TαUFGT-4基因的表达模式分析 | 第54-56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 5 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-70页 |
| 附录 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
