| 符号说明 | 第4-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-23页 |
| 1.1 MAPK级联途径的概述 | 第13-14页 |
| 1.2 植物MAPK级联途径各组分的结构特点 | 第14-16页 |
| 1.2.1 植物MAPK的结构特点 | 第14-15页 |
| 1.2.2 植物MAPKK的结构特点 | 第15页 |
| 1.2.3 植物MAPKKK的结构特点 | 第15-16页 |
| 1.3 MAPK级联途径参与植物抗病 | 第16-20页 |
| 1.3.1 植物固有免疫系统 | 第16-17页 |
| 1.3.2 MAPK级联途径介导的植物抗病信号通路 | 第17-18页 |
| 1.3.3 SA/JA介导的MAPK级联途径调控植物抗病 | 第18-20页 |
| 1.4 棉花枯萎病的研究进展 | 第20-22页 |
| 1.4.1 棉花枯萎病的病原菌及特征 | 第20页 |
| 1.4.2 棉花枯萎病的危害 | 第20-21页 |
| 1.4.3 棉花枯萎病的致病机理 | 第21页 |
| 1.4.4 棉花枯萎病的防治措施 | 第21-22页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-38页 |
| 2.1 材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第23页 |
| 2.1.2 菌株与载体 | 第23页 |
| 2.1.3 酶与其他生化试剂 | 第23页 |
| 2.1.4 PCR引物 | 第23-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-38页 |
| 2.2.1 棉花材料的培养与处理 | 第25-26页 |
| 2.2.2 植物总RNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.2.1 植物RNA快速提取试剂盒提取棉花总RNA | 第26页 |
| 2.2.2.2 TRIzol法提取烟草总RNA | 第26-27页 |
| 2.2.3 cDNA第一条链的合成 | 第27页 |
| 2.2.4 CTAB法提取棉花基因组DNA | 第27-28页 |
| 2.2.5 GhMPK4基因的获得 | 第28页 |
| 2.2.6 点突变序列的获得 | 第28-30页 |
| 2.2.7 PCR扩增目的片段的回收 | 第30页 |
| 2.2.8 目的片段与克隆载体连接 | 第30-31页 |
| 2.2.9 大肠杆菌超级感受态的制备及转化 | 第31-32页 |
| 2.2.9.1 大肠杆菌超级感受态的制备 | 第31页 |
| 2.2.9.2 大肠杆菌感受态细胞转化 | 第31-32页 |
| 2.2.10 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第32页 |
| 2.2.11 重组质粒的酶切验证 | 第32页 |
| 2.2.12 植物表达载体的构建与转化 | 第32-34页 |
| 2.2.12.1 植物表达载体的构建 | 第33页 |
| 2.2.12.2 农杆菌感受态细胞的制备 | 第33页 |
| 2.2.12.3 农杆菌感受态细胞的转化 | 第33-34页 |
| 2.2.12.4 农杆菌介导的瞬时侵染 | 第34页 |
| 2.2.13 超表达烟草植株的获得与鉴定 | 第34-36页 |
| 2.2.13.1 农杆菌介导的叶盘法转化烟草植株 | 第34-35页 |
| 2.2.13.2 再生植株的超表达鉴定 | 第35-36页 |
| 2.2.14 VIGS技术沉默棉花植株 | 第36页 |
| 2.2.15 超表达烟草植株和沉默棉花植株的抗病分析 | 第36页 |
| 2.2.15.1 配置PDA培养基 | 第36页 |
| 2.2.15.2 活化病原菌 | 第36页 |
| 2.2.15.3 病原菌的离体接种 | 第36页 |
| 2.2.16 定点突变表型实验 | 第36-37页 |
| 2.2.17 组织化学染色分析 | 第37页 |
| 2.2.17.1 3,3'二氨基联苯胺染色(3,3'-diaminobenzidine,DAB) | 第37页 |
| 2.2.17.2 台盼蓝染色 | 第37页 |
| 2.2.18 网络信息资源 | 第37页 |
| 2.2.19 生物学软件 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-57页 |
| 3.1 棉花GhMPK4基因的分离 | 第38页 |
| 3.2 GhMPK4的生物信息学分析 | 第38-41页 |
| 3.2.1 GhMPK4编码的氨基酸序列分析 | 第38-39页 |
| 3.2.2 GhMPK4进化树分析 | 第39-41页 |
| 3.3 GhMPK4亚细胞定位分析 | 第41-42页 |
| 3.4 GhMPK4启动子序列分析 | 第42-43页 |
| 3.5 GhMPK4表达特性分析 | 第43-44页 |
| 3.5.1 GhMPK4在棉花不同组织部位的表达特性分析 | 第43页 |
| 3.5.2 GhMPK4在生物胁迫条件下的表达特性分析 | 第43-44页 |
| 3.5.3 GhMPK4在信号分子处理条件下的表达特性分析 | 第44页 |
| 3.6 GhMPK4沉默棉花植株的抗病功能分析 | 第44-48页 |
| 3.6.1 GhMPK4沉默棉花植株的鉴定与获得 | 第44-45页 |
| 3.6.2 GhMPK4沉默棉花植株对棉花枯萎病菌的抗性分析 | 第45-46页 |
| 3.6.3 GhMPK4沉默棉花中抗性相关基因的表达分析 | 第46-48页 |
| 3.7 GhMPK4超表达烟草植株的抗病功能分析 | 第48-51页 |
| 3.7.1 GhMPK4超表达烟草植株的获得和鉴定 | 第48页 |
| 3.7.2 GhMPK4超表达烟草植株对棉花枯萎病菌的抗性分析 | 第48-50页 |
| 3.7.3 GhMPK4超表达烟草植株中抗性相关基因的表达分析 | 第50-51页 |
| 3.8 不同活性的GhMPK4影响植物的抗病性 | 第51-53页 |
| 3.8.1 组成型激活的GhMPK4在棉花叶片中产生类病斑表型 | 第51-52页 |
| 3.8.2 不同活性的GhMPK4对植物抗病性的分子机理研究 | 第52-53页 |
| 3.9 GhMPK4下游互作蛋白的获得 | 第53-54页 |
| 3.10 GhWRKY33沉默棉花植株的抗病功能分析 | 第54-57页 |
| 3.10.1 GhWRKY33沉默棉花植株的获得和鉴定 | 第54-55页 |
| 3.10.2 GhWRKY33沉默棉花植株参与调控棉花对枯萎病的抗性 | 第55-57页 |
| 4 讨论 | 第57-62页 |
| 4.1 GhMPK4属于B组MAPK基因 | 第57页 |
| 4.2 GhMPK4定位于细胞核和细胞质中 | 第57-58页 |
| 4.3 GhMPK4的表达受信号分子和棉花枯萎病菌的影响 | 第58页 |
| 4.4 GhMPK4在植物中参与调控棉花对枯萎病的抗性 | 第58-60页 |
| 4.5 GhMPK4-GhWRKY33级联调控对棉花枯萎病菌的响应 | 第60-62页 |
| 5 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 攻读学位期间发表的论文及成果 | 第72页 |
