| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 综述 | 第13-20页 |
| 1.1 香樟与寒冷胁迫 | 第13-14页 |
| 1.1.1 香樟的生态习性 | 第13页 |
| 1.1.2 香樟的应用价值 | 第13-14页 |
| 1.1.3 香樟受寒冷胁迫的危害 | 第14页 |
| 1.2 香樟抗寒育种的研究进展 | 第14页 |
| 1.2.1 香樟的引种驯化 | 第14页 |
| 1.2.2 转基因香樟的研究进展 | 第14页 |
| 1.3 植物转基因抗寒育种的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.3.1 膜稳定相关基因 | 第15页 |
| 1.3.2 抗氧化酶基因 | 第15-16页 |
| 1.3.3 抗冻蛋白基因 | 第16页 |
| 1.3.4 低温信号转录因子 | 第16页 |
| 1.4 CBF转录因子的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.4.1 CBF转录因子的发现 | 第16-17页 |
| 1.4.2 CBF转录因子的结构特征 | 第17-18页 |
| 1.4.3 CBF基因对COR基因的表达调控 | 第18页 |
| 1.4.4 CBF基因改良植物耐寒性的应用 | 第18页 |
| 1.5 本课题研究的目的及意义 | 第18-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第20页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第20页 |
| 2.1.2 携带重组质粒的农杆菌 | 第20页 |
| 2.2 非生物胁迫下香樟内参基因的筛选 | 第20-22页 |
| 2.2.1 香樟在不同非生物胁迫下的处理 | 第20-21页 |
| 2.2.2 总RNA的提取和cDNA的合成 | 第21页 |
| 2.2.3 内参基因扩增片段特异性检测 | 第21页 |
| 2.2.4 qRT-PCR反应条件 | 第21页 |
| 2.2.5 引物扩增效率的计算 | 第21-22页 |
| 2.2.6 BestKeeper软件分析 | 第22页 |
| 2.3 香樟CCCBFS基因在非生物胁迫下的表达分析 | 第22-23页 |
| 2.3.1 低温、干旱及高盐胁迫处理 | 第22-23页 |
| 2.3.2 总RNA的提取及反转录 | 第23页 |
| 2.3.3 香樟CcCBFs基因的实时定量PCR检测 | 第23页 |
| 2.3.4 数据处理与分析 | 第23页 |
| 2.4 转香樟CCCBFS基因T2代拟南芥的获得及抗逆性分析 | 第23-25页 |
| 2.4.1 拟南芥种植 | 第23-24页 |
| 2.4.2 农杆菌转化 | 第24页 |
| 2.4.3 花序浸染及种子的获得 | 第24-25页 |
| 2.4.4 T2代转香樟CcCBFs基因拟南芥的PCR鉴定 | 第25页 |
| 2.4.5 T2代阳性转基因拟南芥幼苗的非生物胁迫处理 | 第25页 |
| 2.4.6 数据处理与分析 | 第25页 |
| 2.5 转香樟CCCBFS基因T1代烟草的获得 | 第25-27页 |
| 2.5.1 农杆菌转化 | 第25-26页 |
| 2.5.2 烟草的遗传转化及再生 | 第26页 |
| 2.5.3 转基因T1代烟草种子的获得及消毒 | 第26-27页 |
| 2.5.4 转香樟CcCBFs基因烟草的PCR鉴定 | 第27页 |
| 2.6 转香樟CCCBFS基因T1代烟草的抗逆性分析 | 第27-29页 |
| 2.6.1 烟草的低温、干旱及高盐胁迫处理 | 第27页 |
| 2.6.2 脯氨酸含量的测定 | 第27-28页 |
| 2.6.3 可溶性糖含量的测定 | 第28页 |
| 2.6.4 丙二醛含量的测定 | 第28页 |
| 2.6.5 数据处理与分析 | 第28-29页 |
| 第三章 结果与分析 | 第29-46页 |
| 3.1 非生物胁迫下香樟内参基因的筛选 | 第29-32页 |
| 3.1.1 香樟CcACTc和CcEF1α基因片段的PCR扩增分析 | 第29页 |
| 3.1.2 引物扩增效率及特异性分析 | 第29-30页 |
| 3.1.3 香樟CcACTc和CcEF1α基因在各胁迫下的平均Ct值分析 | 第30-31页 |
| 3.1.4 香樟CcACTc和CcEF1α基因的BestKeeper软件分析 | 第31页 |
| 3.1.5 小结 | 第31-32页 |
| 3.2 香樟CCCBFS基因在非生物胁迫下的表达分析 | 第32-35页 |
| 3.2.1 香樟CcCBFs基因在低温胁迫下的表达分析 | 第32-33页 |
| 3.2.2 香樟CcCBFs基因在干旱胁迫下的表达分析 | 第33-34页 |
| 3.2.3 香樟CcCBFs基因在高盐胁迫下的表达分析 | 第34-35页 |
| 3.2.4 小结 | 第35页 |
| 3.3 转香樟CCCBFS基因T2代拟南芥的获得及抗逆性分析 | 第35-39页 |
| 3.3.1 转基因拟南芥阳性鉴定 | 第35-36页 |
| 3.3.2 阳性转基因拟南芥卡那霉素基因的鉴定 | 第36页 |
| 3.3.3 不同胁迫下T2代转基因拟南芥种子发芽率的分析 | 第36-38页 |
| 3.3.4 不同胁迫下T2代转基因拟南芥幼苗平均根长的分析 | 第38-39页 |
| 3.3.5 小结 | 第39页 |
| 3.4 转香樟CCCBFS基因T1代烟草的获得及抗逆性分析 | 第39-46页 |
| 3.4.1 T1代转基因烟草PCR鉴定 | 第39-40页 |
| 3.4.2 非生物胁迫下阳性转基因烟草的表型 | 第40-41页 |
| 3.4.3 阳性转基因烟草的抗寒性分析 | 第41-42页 |
| 3.4.4 阳性转基因烟草的抗旱性分析 | 第42-44页 |
| 3.4.5 阳性转基因烟草的抗盐性分析 | 第44-45页 |
| 3.4.6 小结 | 第45-46页 |
| 第四章 结论与讨论 | 第46-52页 |
| 4.1 非生物胁迫下香樟内参基因的筛选 | 第46-47页 |
| 4.2 香樟CCCBFS基因在非生物胁迫下的表达分析 | 第47-48页 |
| 4.3 香樟CCCBFS基因在转基因拟南芥中的功能分析 | 第48-49页 |
| 4.4 香樟CCCBFS基因在转基因烟草中的功能分析 | 第49-50页 |
| 4.5 香樟CCCBFS基因在香樟抗寒育种中的应用前景 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-59页 |
| 攻读学位期间取得的科研成果 | 第59-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
