首页--农业科学论文--水产、渔业论文--水产保护学论文--鱼病学论文--微生物性鱼病论文--细菌性鱼病论文

哈维氏弧菌YeaZ互作蛋白基因克隆表达及其性质研究

摘要第7-9页
Abstract第9-10页
第1章 绪论第11-17页
    1.1 哈维氏弧菌分布及生物学性质第11页
    1.2 细菌活的非可培养(VBNC)状态的研究进展第11-13页
        1.2.1 VBNC形成及形态特征第11-12页
        1.2.2 VBNC细胞的致病力和耐受性第12页
        1.2.3 VBNC状态细菌的复苏方法第12-13页
    1.3 YjeE、YgjD的发现及蛋白家族基因组成第13-14页
    1.4 YjeE、YgjD蛋白家族的生物学活性第14-15页
    1.5 本课题研究意义及目的第15-17页
第2章 哈维氏弧菌yjeE基因克隆与原核表达第17-33页
    2.1 前言第17页
    2.2 实验材料与仪器第17-19页
        2.2.1 菌株与质粒第17-18页
        2.2.2 主要设备和试剂第18-19页
    2.3 实验方法第19-23页
        2.3.1 哈维氏弧菌yjeE基因的克隆第19-21页
        2.3.2 生物信息学分析第21-22页
        2.3.3 yjeE基因表达质粒的构建及在大肠杆菌中表达第22页
        2.3.4 IPTG诱导ArcticExpress-pCzn1-yjeE载体融合蛋白的表达第22-23页
        2.3.5 Ni离子琼脂糖亲和层析柱纯化表达YjeE蛋白第23页
    2.4 Western-Blotting检测哈维氏弧菌yjeE基因的表达第23页
    2.5 YjeE的ATP酶活性研究第23-24页
    2.6 YjeE对哈维氏弧菌的促生长作用第24页
    2.7 结果与分析第24-30页
        2.7.1 哈维氏弧菌yjeE基因的检测第24页
        2.7.2 哈维氏弧菌yjeE基因克隆分析第24-26页
        2.7.3 yjeE编码氨基酸序列分析第26页
        2.7.4 YjeE蛋白信号肽及磷酸化位点分析第26-27页
        2.7.5 YjeE蛋白二级结构分析第27页
        2.7.6 YjeE蛋白三级结构预测分析第27-28页
        2.7.7 哈维氏弧菌yjeE基因的表达和蛋白纯化第28-29页
        2.7.8 Westernblotting检测纯化的哈维氏弧菌YjeE第29页
        2.7.9 YjeE的ATP酶活性第29页
        2.7.10 YjeE蛋白对哈维氏弧菌SF1生长促进作用第29-30页
    2.8 讨论第30-31页
    2.9 本章小结第31-33页
第3章 哈维氏弧菌ygjD基因克隆与原核表达第33-45页
    3.1 前言第33页
    3.2 实验材料与仪器第33-35页
        3.2.1 实验菌株与质粒第33-35页
        3.2.2 主要试剂和仪器第35页
    3.3 实验方法第35-36页
        3.3.1 哈维氏弧菌ygjD基因克隆第35页
        3.3.2 生物信息学分析第35页
        3.3.3 ygjD基因表达质粒的构建及在大肠杆菌中的表达第35页
        3.3.4 ygjD基因的PCR扩增,PET-28a-ygjD表达质粒构建及鉴定第35-36页
        3.3.5 ygjD基因在大肠杆菌Arctic-Express中的表达与纯化第36页
        3.3.6 包涵体蛋白的变复性第36页
    3.4 融合蛋白的Ni柱亲和纯化第36-37页
    3.5 WesternBlotting检测哈维氏弧菌YgjD的基因表达第37页
    3.6 结果与分析第37-43页
        3.6.1 哈维氏弧菌ygjD基因的检测第37-38页
        3.6.2 哈维氏弧菌ygjD基因的克隆及序列分析第38-39页
        3.6.3 ygjD编码氨基酸序列及蛋白特征分析第39-40页
        3.6.4 YgjD蛋白信号肽及磷酸化位点分析第40-41页
        3.6.5 YgjD蛋白二级结构分析第41页
        3.6.6 YgjD蛋白三级结构预测分析第41-42页
        3.6.7 哈维氏弧菌ygjD基因的表达与纯化第42-43页
        3.6.8 Westernblotting检测纯化的哈维氏弧菌YgjD第43页
    3.7 讨论第43-44页
    3.8 本章小结第44-45页
第4章 哈维氏弧菌YeaZ蛋白的酶活性及生物学作用分析第45-51页
    4.1 前言第45页
    4.2 实验试剂与设备第45-46页
        4.2.1 实验菌株第45页
        4.2.2 实验试剂第45-46页
    4.3 实验方法第46-47页
        4.3.1 哈维氏弧菌YeaZ蛋白及含不同氨基酸突变位点YeaZ蛋白的原核表达及纯化第46页
        4.3.2 不同氨基酸位点突变YeaZ蛋白的酶活性分析第46页
        4.3.3 YeaZ蛋白对哈维氏弧菌的促生长作用第46页
        4.3.4 YeaZ蛋白对VBNC状态哈维氏弧菌的复苏促进作用第46-47页
    4.4 结果第47-49页
        4.4.1 YeaZ活性位点氨基酸突变蛋白的表达纯化第47页
        4.4.2 YeaZ活性位点氨基酸突变对蛋白酶活性的影响第47-48页
        4.4.3 YeaZ对哈维氏弧菌SF1生长促进作用第48页
        4.4.4 突变YeaZ蛋白对VBNC状态哈维氏弧菌复苏促进作用第48-49页
    4.5 讨论第49页
    4.6 本章小结第49-51页
结论第51-52页
参考文献第52-58页
致谢第58-59页
附录 攻读学位期间所发表的学术论文目录第59页

论文共59页,点击 下载论文
上一篇:柞蚕EcR、USP和HK基因的克隆及表达研究
下一篇:迟缓爱德华菌IuxS缺失株构建及其功能分析