摘要 | 第7-9页 |
Abstract | 第9-10页 |
第1章 绪论 | 第11-17页 |
1.1 哈维氏弧菌分布及生物学性质 | 第11页 |
1.2 细菌活的非可培养(VBNC)状态的研究进展 | 第11-13页 |
1.2.1 VBNC形成及形态特征 | 第11-12页 |
1.2.2 VBNC细胞的致病力和耐受性 | 第12页 |
1.2.3 VBNC状态细菌的复苏方法 | 第12-13页 |
1.3 YjeE、YgjD的发现及蛋白家族基因组成 | 第13-14页 |
1.4 YjeE、YgjD蛋白家族的生物学活性 | 第14-15页 |
1.5 本课题研究意义及目的 | 第15-17页 |
第2章 哈维氏弧菌yjeE基因克隆与原核表达 | 第17-33页 |
2.1 前言 | 第17页 |
2.2 实验材料与仪器 | 第17-19页 |
2.2.1 菌株与质粒 | 第17-18页 |
2.2.2 主要设备和试剂 | 第18-19页 |
2.3 实验方法 | 第19-23页 |
2.3.1 哈维氏弧菌yjeE基因的克隆 | 第19-21页 |
2.3.2 生物信息学分析 | 第21-22页 |
2.3.3 yjeE基因表达质粒的构建及在大肠杆菌中表达 | 第22页 |
2.3.4 IPTG诱导ArcticExpress-pCzn1-yjeE载体融合蛋白的表达 | 第22-23页 |
2.3.5 Ni离子琼脂糖亲和层析柱纯化表达YjeE蛋白 | 第23页 |
2.4 Western-Blotting检测哈维氏弧菌yjeE基因的表达 | 第23页 |
2.5 YjeE的ATP酶活性研究 | 第23-24页 |
2.6 YjeE对哈维氏弧菌的促生长作用 | 第24页 |
2.7 结果与分析 | 第24-30页 |
2.7.1 哈维氏弧菌yjeE基因的检测 | 第24页 |
2.7.2 哈维氏弧菌yjeE基因克隆分析 | 第24-26页 |
2.7.3 yjeE编码氨基酸序列分析 | 第26页 |
2.7.4 YjeE蛋白信号肽及磷酸化位点分析 | 第26-27页 |
2.7.5 YjeE蛋白二级结构分析 | 第27页 |
2.7.6 YjeE蛋白三级结构预测分析 | 第27-28页 |
2.7.7 哈维氏弧菌yjeE基因的表达和蛋白纯化 | 第28-29页 |
2.7.8 Westernblotting检测纯化的哈维氏弧菌YjeE | 第29页 |
2.7.9 YjeE的ATP酶活性 | 第29页 |
2.7.10 YjeE蛋白对哈维氏弧菌SF1生长促进作用 | 第29-30页 |
2.8 讨论 | 第30-31页 |
2.9 本章小结 | 第31-33页 |
第3章 哈维氏弧菌ygjD基因克隆与原核表达 | 第33-45页 |
3.1 前言 | 第33页 |
3.2 实验材料与仪器 | 第33-35页 |
3.2.1 实验菌株与质粒 | 第33-35页 |
3.2.2 主要试剂和仪器 | 第35页 |
3.3 实验方法 | 第35-36页 |
3.3.1 哈维氏弧菌ygjD基因克隆 | 第35页 |
3.3.2 生物信息学分析 | 第35页 |
3.3.3 ygjD基因表达质粒的构建及在大肠杆菌中的表达 | 第35页 |
3.3.4 ygjD基因的PCR扩增,PET-28a-ygjD表达质粒构建及鉴定 | 第35-36页 |
3.3.5 ygjD基因在大肠杆菌Arctic-Express中的表达与纯化 | 第36页 |
3.3.6 包涵体蛋白的变复性 | 第36页 |
3.4 融合蛋白的Ni柱亲和纯化 | 第36-37页 |
3.5 WesternBlotting检测哈维氏弧菌YgjD的基因表达 | 第37页 |
3.6 结果与分析 | 第37-43页 |
3.6.1 哈维氏弧菌ygjD基因的检测 | 第37-38页 |
3.6.2 哈维氏弧菌ygjD基因的克隆及序列分析 | 第38-39页 |
3.6.3 ygjD编码氨基酸序列及蛋白特征分析 | 第39-40页 |
3.6.4 YgjD蛋白信号肽及磷酸化位点分析 | 第40-41页 |
3.6.5 YgjD蛋白二级结构分析 | 第41页 |
3.6.6 YgjD蛋白三级结构预测分析 | 第41-42页 |
3.6.7 哈维氏弧菌ygjD基因的表达与纯化 | 第42-43页 |
3.6.8 Westernblotting检测纯化的哈维氏弧菌YgjD | 第43页 |
3.7 讨论 | 第43-44页 |
3.8 本章小结 | 第44-45页 |
第4章 哈维氏弧菌YeaZ蛋白的酶活性及生物学作用分析 | 第45-51页 |
4.1 前言 | 第45页 |
4.2 实验试剂与设备 | 第45-46页 |
4.2.1 实验菌株 | 第45页 |
4.2.2 实验试剂 | 第45-46页 |
4.3 实验方法 | 第46-47页 |
4.3.1 哈维氏弧菌YeaZ蛋白及含不同氨基酸突变位点YeaZ蛋白的原核表达及纯化 | 第46页 |
4.3.2 不同氨基酸位点突变YeaZ蛋白的酶活性分析 | 第46页 |
4.3.3 YeaZ蛋白对哈维氏弧菌的促生长作用 | 第46页 |
4.3.4 YeaZ蛋白对VBNC状态哈维氏弧菌的复苏促进作用 | 第46-47页 |
4.4 结果 | 第47-49页 |
4.4.1 YeaZ活性位点氨基酸突变蛋白的表达纯化 | 第47页 |
4.4.2 YeaZ活性位点氨基酸突变对蛋白酶活性的影响 | 第47-48页 |
4.4.3 YeaZ对哈维氏弧菌SF1生长促进作用 | 第48页 |
4.4.4 突变YeaZ蛋白对VBNC状态哈维氏弧菌复苏促进作用 | 第48-49页 |
4.5 讨论 | 第49页 |
4.6 本章小结 | 第49-51页 |
结论 | 第51-52页 |
参考文献 | 第52-58页 |
致谢 | 第58-59页 |
附录 攻读学位期间所发表的学术论文目录 | 第59页 |