| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 前言 | 第11-26页 |
| 1.1 香蕉概述 | 第11-14页 |
| 1.1.1 香蕉的经济价值 | 第11页 |
| 1.1.2 香蕉果实采后成熟过程对香蕉品质的影响 | 第11页 |
| 1.1.3 香蕉果实采后成熟的分子生物学研究进展 | 第11-13页 |
| 1.1.4 香蕉生长对环境的要求及挖掘抗逆基因的必要性 | 第13-14页 |
| 1.2 苹果酸脱氢酶(MDH)基因的研究进展 | 第14-23页 |
| 1.2.1 植物MDH概述 | 第14-15页 |
| 1.2.2 MDH在物质和能量代谢中的研究 | 第15-19页 |
| 1.2.3 MDH在植物发育中的研究 | 第19-20页 |
| 1.2.4 MDH与非生物胁迫的研究 | 第20-22页 |
| 1.2.5 细胞质型苹果酸脱氢酶(cyMDH)研究进展 | 第22-23页 |
| 1.3 研究内容 | 第23-24页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第24-25页 |
| 1.5 技术路线 | 第25-26页 |
| 2 材料、试剂与仪器 | 第26页 |
| 2.1 材料 | 第26页 |
| 2.2 试剂 | 第26页 |
| 2.3 仪器 | 第26页 |
| 3 方法 | 第26-34页 |
| 3.1 采后香蕉果实处理 | 第26-27页 |
| 3.2 香蕉苗逆境胁迫处理 | 第27-28页 |
| 3.2.1 干旱胁迫处理 | 第27页 |
| 3.2.2 冷害胁迫处理 | 第27页 |
| 3.2.3 伤害胁迫处理 | 第27-28页 |
| 3.2.4 盐渍胁迫 | 第28页 |
| 3.2.5 铝离子胁迫 | 第28页 |
| 3.2.6 乙烯利处理 | 第28页 |
| 3.3 尖孢镰刀菌4号生理小种(FOC4)侵染香蕉苗 | 第28页 |
| 3.4 香蕉果实采后生理指标的测定 | 第28-30页 |
| 3.4.1 香蕉果实采后乙烯释放量的测定 | 第28-29页 |
| 3.4.2 香蕉果实采后成熟度的划分 | 第29页 |
| 3.4.3 细胞质总酶的提取及MaMDH酶活性的测定 | 第29页 |
| 3.4.4 香蕉果实采后苹果酸的测定 | 第29页 |
| 3.4.5 香蕉果实采后可溶性总糖的测定 | 第29-30页 |
| 3.5 香蕉不同器官,果实不同处理及香蕉苗总RNA提取 | 第30页 |
| 3.6 cDNA第一链的合成 | 第30页 |
| 3.7 MaMDH基因的克隆 | 第30-33页 |
| 3.7.1 从香蕉果实cDNA文库中克隆MaMDH基因5’端 | 第30-33页 |
| 3.7.1.1 引物设计 | 第30-31页 |
| 3.7.1.2 PCR反应体系和程序 | 第31页 |
| 3.7.1.3 目的片段回收 | 第31页 |
| 3.7.1.4 回收产物与pMD19-T vector连接 | 第31-32页 |
| 3.7.1.5 E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第32页 |
| 3.7.1.6 连接产物转化E.coli DH5α | 第32页 |
| 3.7.1.7 重组质粒DNA的小量提取 | 第32页 |
| 3.7.1.8 重组质粒的PCR和酶切鉴定及测序 | 第32-33页 |
| 3.7.2 MaMDH cDNA全长克隆 | 第33页 |
| 3.7.2.1 引物设计 | 第33页 |
| 3.7.2.2 PCR反应体系和反应程序 | 第33页 |
| 3.7.2.3 PCR产物回收、连接、转化及质粒提取鉴定 | 第33页 |
| 3.8 生物信息学分析 | 第33页 |
| 3.9 荧光定量RT-PCR分析MaMDH基因 | 第33-34页 |
| 3.9.1 eDNA第一链的合成 | 第33页 |
| 3.9.2 荧光定量PCR的引物设计 | 第33-34页 |
| 3.9.3 荧光定量PCR的反应体系和反应程序 | 第34页 |
| 3.9.4 荧光定量PCR的定量方法 | 第34页 |
| 4 结果 | 第34-51页 |
| 4.1 MaMDH基因的克隆 | 第34-36页 |
| 4.1.1 MaMDH基因5′端序列的克隆 | 第34-35页 |
| 4.1.2 MaMDH cDNA全长克隆 | 第35-36页 |
| 4.2 MaMDH的序列分析 | 第36-40页 |
| 4.2.1 生物信息学分析 | 第36-37页 |
| 4.2.2 MaMDH的进化树分析 | 第37-40页 |
| 4.3 MaMDH基因在香蕉各器官的差异表达 | 第40页 |
| 4.4 MaMDH基因在香蕉果实采后不同时期的表达分析 | 第40-45页 |
| 4.4.1 香蕉果实采后成熟过程中乙烯释放速率的测定 | 第40-41页 |
| 4.4.2 MaMDH基因在香蕉果实采后成熟过程中的表达分析 | 第41-42页 |
| 4.4.3 MaMDH在香蕉果实采后正常成熟过程中的酶活性测定 | 第42页 |
| 4.4.4 香蕉果实采后正常成熟过程苹果酸含量的测定 | 第42页 |
| 4.4.5 香蕉果实采后正常成熟过程可溶性总糖的测定 | 第42-45页 |
| 4.5 MaMDH基因对非生物胁迫的应答 | 第45-50页 |
| 4.5.1 MaMDH基因在香蕉苗干旱胁迫下的差异表达 | 第45-46页 |
| 4.5.2 MaMDH基因在香蕉苗低温胁迫下的差异表达 | 第46-47页 |
| 4.5.3 MaMDH基因在香蕉苗伤害胁迫下的差异表达及酶活性 | 第47-49页 |
| 4.5.4 MaMDH基因在香蕉苗盐胁迫下的差异表达 | 第49页 |
| 4.5.5 MaMDH基因在香蕉苗Al~(3+)胁迫下的差异表达 | 第49-50页 |
| 4.5.6 MaMDH基因在香蕉苗乙烯利处理下的差异表达 | 第50页 |
| 4.6 MaMDH基因在香蕉苗FOC4侵染下的差异表达 | 第50-51页 |
| 5 讨论 | 第51-55页 |
| 5.1 MaMDH基因的克隆与序列分析 | 第51页 |
| 5.2 MaMDH基因器官差异性表达分析 | 第51页 |
| 5.3 MaMDH基因在香蕉果实采后成熟过程中的表达分析 | 第51-53页 |
| 5.4 MaMDH基因与逆境胁迫的关系 | 第53-55页 |
| 5.4.1 MaMDH基因与干旱胁迫,盐胁迫,低温胁迫的关系 | 第53-54页 |
| 5.4.2 MaMDH基因与伤害胁迫的关系 | 第54页 |
| 5.4.3 MaMDH基因与Al~(3+)胁迫的关系 | 第54-55页 |
| 5.4.4 MaMDH基因与乙烯利胁迫的关系 | 第55页 |
| 5.4.5 MaMDH基因与枯萎病菌(FOC4)的关系 | 第55页 |
| 6 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
