| 摘要 | 第7-8页 |
| ABSTRACT | 第8页 |
| 缩略语表 | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第11-19页 |
| 1.1 糙皮侧耳概况 | 第11-13页 |
| 1.1.1 糙皮侧耳的食用历史及营养、药用价值 | 第11-12页 |
| 1.1.2 糙皮侧耳的栽培及潜在价值 | 第12页 |
| 1.1.3 糙皮侧耳的生物学特性及生活史 | 第12-13页 |
| 1.2 差异表达基因的研究方法 | 第13-19页 |
| 1.2.1 mRNA差异显示技术(DDRT-PCR) | 第14-15页 |
| 1.2.2 代表性差异分析(RDA) | 第15页 |
| 1.2.3 基因表达系列分析(SAGE) | 第15-16页 |
| 1.2.4 cDNA芯片(cDNA Microarray) | 第16页 |
| 1.2.5 抑制性消减杂交(SSH) | 第16-19页 |
| 1.3 本课题研究目的、意义与主要内容 | 第19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 实验菌株 | 第19页 |
| 2.1.2 实验中所用Adaptor和Primer序列 | 第19-20页 |
| 2.2 主要试剂耗材与设备 | 第20-22页 |
| 2.2.1 主要实验试剂与耗材 | 第20-21页 |
| 2.2.2 实验耗材预处理 | 第21-22页 |
| 2.2.3 实验设备 | 第22页 |
| 2.3 培养基与溶液配制 | 第22-24页 |
| 2.3.1 培养基配制 | 第22-23页 |
| 2.3.2 溶液配制 | 第23-24页 |
| 2.4 实验方法 | 第24-37页 |
| 2.4.1 菌种活化 | 第24-25页 |
| 2.4.2 实验材料的培养 | 第25页 |
| 2.4.3 M739和P739总RNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.4.4 抑制性消减杂交文库的构建 | 第26-33页 |
| 2.4.4.1 cDNA第一链的合成 | 第26页 |
| 2.4.4.2 cDNA第二链的合成 | 第26-27页 |
| 2.4.4.3 RsaⅠ酶切 | 第27-28页 |
| 2.4.4.4 接头连接 | 第28页 |
| 2.4.4.5 接头连接效率分析 | 第28-29页 |
| 2.4.4.6 第一次杂交 | 第29-30页 |
| 2.4.4.7 第二次杂交 | 第30页 |
| 2.4.4.8 PCR扩增 | 第30-32页 |
| 2.4.4.9 消减效率分析 | 第32-33页 |
| 2.4.4.10 消减产物连接载体 | 第33页 |
| 2.4.4.11 连接产物转化 | 第33页 |
| 2.4.4.12 文库插入片段长度检测及筛选 | 第33页 |
| 2.4.5 SSH文库的筛选——反向Northern杂交 | 第33-35页 |
| 2.4.5.1 杂交膜的准备 | 第34页 |
| 2.4.5.2 点膜 | 第34页 |
| 2.4.5.3 探针的制备与标记 | 第34-35页 |
| 2.4.5.4 分子杂交 | 第35页 |
| 2.4.5.5 免疫学检测 | 第35页 |
| 2.4.6 差异表达克隆的挑取及测序 | 第35-36页 |
| 2.4.7 差异表达基因的RT-PCR检测 | 第36-37页 |
| 2.4.7.1 M739和P739总RNA的提取 | 第36页 |
| 2.4.7.2 cDNA第一链的合成 | 第36页 |
| 2.4.7.3 PCR扩增 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-52页 |
| 3.1 M739和P739总RNA的提取 | 第37-38页 |
| 3.2 双链cDNA的合成与酶切效果检测 | 第38页 |
| 3.3 接头连接效率检测 | 第38-40页 |
| 3.4 消减杂交后产物的两轮PCR扩增结果 | 第40-42页 |
| 3.5 消减效率的PCR分析 | 第42-44页 |
| 3.6 文库插入片断大小检测 | 第44-46页 |
| 3.7 反向Northern杂交筛选 | 第46页 |
| 3.8 测序结果与序列分析 | 第46-48页 |
| 3.9 RT-PCR结果分析 | 第48-52页 |
| 4 讨论 | 第52-56页 |
| 4.1 材料的选择及RNA提取 | 第52-53页 |
| 4.2 SSH文库的构建过程探讨 | 第53页 |
| 4.3 反向Northern杂交过程 | 第53-54页 |
| 4.4 SSH技术中得到的差异表达基因 | 第54-56页 |
| 4.4.1 线粒体加工肽酶(MPP) | 第54-55页 |
| 4.4.2 电压依赖性阴离子通道(VDAC) | 第55-56页 |
| 5 下一步工作 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 研究生在读期间发表文章 | 第65页 |
