中文摘要 | 第8-11页 |
Abstract | 第11-13页 |
缩略词表 | 第14-15页 |
第一章 引言 | 第15-20页 |
一、胃癌的表观遗传学研究 | 第15-17页 |
1. 胃癌概述 | 第15-16页 |
2. 表观遗传学概述 | 第16-17页 |
3. 胃癌的表观遗传学研究现状 | 第17页 |
二、HOXA11 基因概况 | 第17-19页 |
1. HOXA11 基因结构和功能 | 第17-18页 |
2. HOXA11 与肿瘤 | 第18-19页 |
三、本研究的目的、内容及意义 | 第19-20页 |
第二章 HOXA11 在胃癌细胞系中的表达及甲基化改变 | 第20-33页 |
第一节 前言 | 第20页 |
第二节 材料方法 | 第20-29页 |
2.2.1 实验材料 | 第20页 |
2.2.2 试剂及耗材 | 第20-23页 |
2.2.3 主要实验仪器 | 第23页 |
2.2.4 细胞培养及药物处理 | 第23-24页 |
2.2.5 总 RNA 的提取 | 第24页 |
2.2.6 HOXA11 基因(RT-PCR) | 第24-25页 |
2.2.7 基因组 DNA 提取 | 第25-26页 |
2.2.8 MSP 阳性对照 DNA 制备(In vitro methyated DNA,IVD) | 第26页 |
2.2.9 非甲基化阳性对照 | 第26页 |
2.2.10 双阴性对照(双蒸水) | 第26页 |
2.2.11 胃癌 DNA 亚硫酸盐处理及甲基化特异 PCR | 第26-29页 |
第三节 结果 | 第29-31页 |
2.3.1 胃癌细胞系 HOXA11 基因的表达检测 | 第29-30页 |
2.3.2 胃癌细胞系 HOXA11 基因启动子区甲基化检测 | 第30-31页 |
第四节 讨论 | 第31-32页 |
第五节 小结 | 第32-33页 |
第三章 胃癌组织中 HOXA11 基因启动子区甲基化检测 | 第33-39页 |
第一节 前言 | 第33页 |
第二节 材料方法 | 第33-37页 |
3.2.1 实验标本 | 第33页 |
3.2.2 主要试剂与耗材 | 第33-34页 |
3.2.3 主要仪器及设备 | 第34-35页 |
3.2.4 缓冲液的制备 | 第35页 |
3.2.5 组织 DNA 的提取 | 第35-36页 |
3.2.6 统计学分析 | 第36-37页 |
第三节 结果 | 第37-38页 |
第四节 讨论 | 第38-39页 |
第四章 胃癌及癌旁组织中 HOXA11 基因的表达研究 | 第39-44页 |
第一节 前言 | 第39-40页 |
第二节 试剂耗材 | 第40-43页 |
4.2.1 主要试剂 | 第40页 |
4.2.2 主要实验仪器 | 第40页 |
4.2.3 缓冲液的配置 | 第40-41页 |
4.2.4 HOXA11 基因免疫组织化学染色 | 第41-43页 |
第三节 结果 | 第43-44页 |
4.3.1 HOXA11 在胃癌及癌旁组织中的表达 | 第43-44页 |
第四节 讨论 | 第44页 |
第五节 小结 | 第44页 |
第五章 HOXA11 抑癌作用的体外实验研究 | 第44-57页 |
第一节 前言 | 第44-45页 |
第二节 材料方法 | 第45-46页 |
5.2.1 主要实验耗材 | 第45页 |
5.2.2 实验仪器 | 第45-46页 |
第三节 实验方法 | 第46-49页 |
5.3.1 细胞增殖实验 | 第46页 |
5.3.2 克隆形成实验 | 第46-47页 |
5.3.3 细胞划痕实验 | 第47页 |
5.3.4 细胞侵袭及迁移实验 | 第47-48页 |
5.3.5 细胞凋亡及周期检测 | 第48-49页 |
第四节 实验结果 | 第49-55页 |
5.4.1 HOXA11 基因对细胞生长及克隆形成能力的影响 | 第49-50页 |
5.4.2 HOXA11 对胃癌细胞 AGS 细胞周期的 | 第50-51页 |
5.4.3 HOXA11 对胃癌细胞 AGS 凋亡的影响 | 第51-52页 |
5.4.4 HOXA11 对胃癌细胞 AGS 侵袭迁移能力的影响 | 第52-55页 |
第五节 讨论 | 第55-57页 |
第六节 小结 | 第57页 |
第六章 HOXA11 所调节的下游靶基因 | 第57-68页 |
第一节 前言 | 第57页 |
第二节 实验材料 | 第57-59页 |
6.2.1 主要实验材料 | 第57-58页 |
6.2.2 实验试剂与耗材 | 第58页 |
6.2.3 实验仪器 | 第58-59页 |
第三节 实验方法 | 第59-64页 |
6.3.1 细胞培养及 RNA 提取 | 第59页 |
6.3.2 HOXA11 真核表达载体的构建 | 第59-63页 |
6.3.3 质粒转染 | 第63页 |
6.3.4 基因芯片分析 | 第63页 |
6.3.5 芯片结果验证 | 第63-64页 |
第四节 实验结果 | 第64-67页 |
6.4.1 基因芯片结果 | 第64-66页 |
6.4.2 RNA 及蛋白水平验证芯片结果 | 第66-67页 |
第五节 讨论 | 第67-68页 |
第六节 小结 | 第68页 |
第七章 HOXA11 对 WNT 信号通路的作用 | 第68-76页 |
第一节 前言 | 第68-69页 |
第二节 材料方法 | 第69-70页 |
7.2.1 主要实验耗材 | 第69页 |
7.2.2 实验仪器设备 | 第69-70页 |
第三节 实验方法 | 第70-72页 |
7.3.1 Western Blot | 第70-71页 |
7.3.2 双荧光素酶报告系统检测 | 第71页 |
7.3.3 免疫组织化学染色(IHC) | 第71页 |
7.3.4 细胞总蛋白提取与定量 | 第71-72页 |
第四节 实验结果 | 第72-75页 |
7.4.1 HOXA11 基因对 WNT/β-catenin 信号通路的作用 | 第72-75页 |
第五节 结论 | 第75-76页 |
第六节 小结 | 第76页 |
第八章 结论 | 第76-77页 |
参考文献 | 第77-82页 |
文献综述 | 第82-90页 |
1. 肿瘤表观遗传学 | 第82-83页 |
2. HOXA11 基因结构 | 第83页 |
3. HOXA11 基因在肿瘤中的功能研究 | 第83-84页 |
4. HOXA11 对人体发育的影响 | 第84页 |
5.HOXA11 在多肿瘤中发生甲基化改变 | 第84-86页 |
6.HOXA11 在肿瘤发生发展中的机制研究 | 第86页 |
7.表观遗传学药物与临床肿瘤治疗前景 | 第86-87页 |
参考文献 | 第87-90页 |
攻读学位期间发表文章情况 | 第90-91页 |
致谢 | 第91-92页 |