| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表（Abbreviation） | 第12-16页 |
| 第1章 文献综述 | 第16-32页 |
| 1.1 抗病毒天然免疫 | 第16-20页 |
| 1.1.1 病毒诱导Ⅰ型干扰素产生信号通路 | 第16-20页 |
| 1.1.2 Ⅰ型干扰素介导抗病毒作用 | 第20页 |
| 1.2 天然免疫中的泛素化与去泛素化 | 第20-28页 |
| 1.2.1 泛素化修饰简介 | 第21-22页 |
| 1.2.2 泛素化修饰参与调控抗病毒天然免疫 | 第22-25页 |
| 1.2.3 去泛素化酶 | 第25-26页 |
| 1.2.4 去泛素化酶参与调控抗病毒天然免疫 | 第26-28页 |
| 1.3 病毒与泛素化修饰 | 第28-30页 |
| 1.3.1 泛素蛋白酶体途径参与病毒复制 | 第28-29页 |
| 1.3.2 病毒蛋白的泛素化修饰 | 第29页 |
| 1.3.3 病毒蛋白参与调控天然免疫信号通路中的泛素化修饰 | 第29-30页 |
| 1.4 猪繁殖与呼吸综合征研究进展 | 第30-32页 |
| 第2章 泛素特异性蛋白酶USP15调控Ⅰ型干扰素的机制研究 | 第32-71页 |
| 2.1 研究目的与意义 | 第32页 |
| 2.2 实验材料 | 第32-38页 |
| 2.2.1 细胞、毒株、菌株 | 第32页 |
| 2.2.2 载体与质粒 | 第32-34页 |
| 2.2.3 工具酶、siRNA及主要试剂 | 第34页 |
| 2.2.4 Western blot及Co-IP所需实验材料 | 第34-35页 |
| 2.2.5 培养基及其配制 | 第35页 |
| 2.2.6 主要缓冲液与相关试剂及其配制 | 第35-37页 |
| 2.2.7 主要实验仪器及设备 | 第37-38页 |
| 2.3 实验方法 | 第38-43页 |
| 2.3.1 RNA提取 | 第38页 |
| 2.3.2 USP15表达质粒的构建 | 第38-39页 |
| 2.3.3 双荧光素酶检测实验 | 第39页 |
| 2.3.4 SYBR Green I 实时荧光定量 PCR 检测基因 m RNA 水平 | 第39-40页 |
| 2.3.5 Western blot及Co-IP实验 | 第40-41页 |
| 2.3.6 体外去泛素化实验 | 第41-42页 |
| 2.3.7 蛋白表达与纯化 | 第42页 |
| 2.3.8 GST pulldown实验 | 第42-43页 |
| 2.3.9 统计学方法 | 第43页 |
| 2.4 结果与分析 | 第43-64页 |
| 2.4.1 USP15负调控Ⅰ型干扰素免疫应答 | 第43-49页 |
| 2.4.2 USP15去泛素活性鉴定 | 第49-53页 |
| 2.4.3 USP15可以去除RIG-I的泛素化修饰 | 第53-54页 |
| 2.4.4 USP15特异性去除RIG-I K63连接形式的泛素化修饰 | 第54-56页 |
| 2.4.5 USP15负调控RIG-I激活的干扰素表达 | 第56-57页 |
| 2.4.6 USP15抑制干扰素产生不完全依赖于去泛素化活性 | 第57-59页 |
| 2.4.7 USP15与RIG-I存在相互作用 | 第59-62页 |
| 2.4.8 USP15竞争性抑制RIG-I对IPS-1 的募集作用 | 第62-63页 |
| 2.4.9 USP15可以通过不依赖去泛素化活性的机制负向调控干扰素产生 | 第63-64页 |
| 2.5 讨论 | 第64-71页 |
| 2.5.1 USP15通过去除RIG-I K63连接形式的泛素化负向调控干扰素产生 | 第65-66页 |
| 2.5.2 USP15通过竞争性抑制RIG-I对IPS-1 的募集负向调控干扰素产生 | 第66-68页 |
| 2.5.3 其他团队的相关研究 | 第68-71页 |
| 第3章 PRRSV感染细胞的泛素化蛋白质组学 | 第71-92页 |
| 3.1 研究目的与意义 | 第71页 |
| 3.2 实验材料 | 第71-73页 |
| 3.2.1 实验动物 | 第71页 |
| 3.2.2 细胞与毒株 | 第71-72页 |
| 3.2.3 质粒 | 第72页 |
| 3.2.4 主要试剂 | 第72页 |
| 3.2.5 抗体及Western blot所需实验材料 | 第72页 |
| 3.2.6 细胞培养基及其配制 | 第72页 |
| 3.2.7 主要缓冲液与相关试剂及其配制 | 第72页 |
| 3.2.8 主要实验仪器及设备 | 第72-73页 |
| 3.3 实验方法 | 第73-77页 |
| 3.3.1 原代PAM细胞的分离 | 第73页 |
| 3.3.2 PRRSV的增殖 | 第73-74页 |
| 3.3.3 病毒滴度的测定 | 第74页 |
| 3.3.4 间接免疫荧光与激光共聚焦显微镜的观察 | 第74-75页 |
| 3.3.5 用于蛋白质组学分析的细胞样品的制备 | 第75页 |
| 3.3.6 全细胞蛋白质的提取 | 第75-76页 |
| 3.3.7 蛋白质的酶解 | 第76页 |
| 3.3.8 高效液相色谱分离 | 第76页 |
| 3.3.9 富集泛素化肽段 | 第76页 |
| 3.3.10 LC-MS/MS分析 | 第76-77页 |
| 3.3.11 生物信息学分析 | 第77页 |
| 3.3.12 Western blot及Co-IP实验 | 第77页 |
| 3.4 结果与分析 | 第77-87页 |
| 3.4.1 PRRSV感染PAM细胞动力学分析 | 第77-78页 |
| 3.4.2 蛋白质的定量信息及泛素化修饰差异蛋白的筛选 | 第78-80页 |
| 3.4.3 泛素化修饰差异蛋白的亚细胞注释 | 第80-81页 |
| 3.4.4 泛素化修饰差异蛋白的GO及KEGG通路分析 | 第81-82页 |
| 3.4.5 修饰位点Motif分析 | 第82-83页 |
| 3.4.6 差异蛋白质组学与泛素化修饰组学关联分析 | 第83-84页 |
| 3.4.7 PRRSV编码蛋白的泛素化修饰 | 第84-86页 |
| 3.4.8 泛素蛋白酶体系统对PRRSV增殖是必须的 | 第86-87页 |
| 3.5 讨论 | 第87-92页 |
| 3.5.1 PRRSV感染影响NF-κB信号通路中蛋白的泛素化修饰 | 第88-89页 |
| 3.5.2 PRRSV感染影响Ⅰ型干扰素信号通路中蛋白的泛素化修饰 | 第89-90页 |
| 3.5.3 PRRSV编码蛋白可以发生泛素化修饰 | 第90-92页 |
| 第4章 结论 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-112页 |
| 致谢 | 第112-114页 |
| 附表 | 第114-137页 |
| 个人资料 | 第137页 |
| 教育经历 | 第137页 |
| 在读期间发表的主要文章 | 第137-140页 |
